肠道病毒D68型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 肠道病毒D68型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Enterovirus D68 Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4637 |
产品基本信息
规格：50次/盒（20μL体系/次）
有效期：12个月（-15℃以下避光保存）
适用领域：科研用途，非临床诊断。
产品特点
即开即用：仅需提供样品RNA模板，无需额外优化引物或探针。
高灵敏度与特异性：引物及探针针对EV-D68高度保守区设计，避免与其他病毒RNA交叉反应。
双重检测功能：支持定性与定量检测，定量线性范围≥5个数量级。
内控设计：包含阳性质控品（5.59×10⁴拷贝/μL）和阴性质控品，有效区分假阴性。
兼容性：适配ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪。
试剂盒组分
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 扩增液或PCR MagicMix | 50μL/1 mL |
| 试剂二 | 反应液或超纯水 | 950μL/1 mL |
| 试剂三 | 引物混合液 | 100μL |
| 试剂四 | 阳性质控品 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL） |
| 试剂五 | 阴性质控品 | 50μL |
| - | 说明书 | 1份 |
操作流程
1. 样本处理
样本类型：组织、全血、粪便等。
组织样本：研磨后离心取上清；
全血样本：分离血清后提取RNA。
RNA提取：推荐使用商品化病毒RNA提取试剂盒，提取后-15℃保存。
2. 试剂配制
按N（样本数+2质控）配制反应体系（20μL/管）：
反应液19μL + 扩增液1μL + 模板RNA 5μL。
3. PCR扩增
程序设置：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 50℃ | 15 min | 1 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 55℃ | 30 sec | 40 |
荧光通道：FAM检测，无淬灭通道。
4. 结果判读
阳性：Ct≤35且呈指数扩增曲线；
可疑：35<Ct≤38，需复测；
阴性：无Ct值或Ct>38。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免交叉污染。
防污染措施：使用带滤芯吸头，实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。
运输与储存：-20℃以下运输，避免反复冻融（≤5次）。
质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30。
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