检测原理
基于TaqMan探针法实时荧光定量RT-PCR技术，通过特异性引物和探针靶向CVA6变种高度保守区，实现RNA反转录（RT）与扩增（PCR）同步进行。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如NFQ），扩增过程中Taq酶切割探针释放荧光信号，通过Ct值定量分析起始模板浓度。
产品名称 | 柯萨奇病毒CVA6型变种探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Coxsackievirus A6 (CVA6) Variant Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4866 |
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL/950μL | 提供反应体系基础环境 |
| qRT-PCR酶混合液 | 50-100μL | 含逆转录酶、Taq酶及dNTPs |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |
| 引物-探针混合液 | 50-100μL（干粉或预混液） | 特异性扩增CVA6靶序列 |
| 阳性对照（无传染性） | 50μL（1×10^7~10^8拷贝/μL） | 标准曲线建立及实验质控 |
| 阴性对照 | 50μL（部分品牌提供） | 排除污染及假阳性 |
操作步骤
标准曲线制备（10倍梯度稀释阳性对照，6个浓度点，如10^2~10^7拷贝/μL）。
样本RNA提取：推荐使用兼容性病毒RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性提取对照（NC/PC）。
反应体系配置（20μL/管）：
缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 引物探针混合液3μL + 模板RNA 5μL。
PCR程序：
逆转录：50℃ 10-30分钟 → 预变性：95℃ 10分钟 → 40循环（95℃ 15秒 → 60℃ 60秒，采集FAM信号）。
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：Ct≤39为阳性，≥40为阴性，39-40间需复测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免交叉污染。
质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39且扩增曲线正常。
保存与运输：-20℃保存，冰袋运输（2-8℃），严禁反复冻融。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
提取效率差异或操作不当影响结果准确性。
声明
本产品仅限科研使用，检测结果需结合其他临床指标综合判断。操作人员需具备分子生物学实验经验，严格遵守生物安全规范。
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关键字： 柯萨奇病毒CVA6型变种;染料法荧光定量;PCR试剂盒;