产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR（qPCR）技术，专用于检测胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis）的核酸。该菌为革兰氏阴性胞内寄生菌，可引发猪增生性回肠炎，对畜牧业危害显著。本产品具备高灵敏度和特异性，适用于科研领域的定性或定量分析。
产品名称 | 胞内劳森菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Intracellular Lawsonia Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4876 |
产品特点
高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应，可有效避免假阴性。
特异性强：引物及探针针对胞内劳森菌保守序列设计，无交叉反应。
双重检测模式：支持绝对定量（线性范围≥5个数量级）和定性分析。
即开即用：用户仅需提供DNA模板，操作便捷。
安全对照：提供无传染性DNA片段作为阳性对照（10^7拷贝/μL）。
包装规格
| 成分 | 规格 |
| qPCR缓冲液 | 500 μL |
| qPCR酶混合液 | 50 μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 引物-探针干粉 | 50次反应 |
| 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50 μL |
操作流程
标准曲线制备（定量分析）
稀释阳性对照：
使用带芯枪头，按10倍梯度稀释阳性对照（10^1–10^6拷贝/μL），独立操作避免污染。
标记离心管（6–1号），依次加入45 μL稀释液及5 μL上一步稀释产物，涡旋混匀。
样本DNA制备
建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。PC为阳性对照1000倍稀释液。
兼容市售DNA提取试剂盒，需避免交叉污染。
qPCR反应（20 μL体系）
反应体系：
定量分析：N+9个反应管（含6个标准曲线点）。
定性分析：仅需1个标准曲线点（建议10^4拷贝/μL）。
PCR程序：
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 10 min |
| 预变性 | 95℃ | 10 min |
| 扩增循环 | 95℃ | 15 sec |
| （40循环） | 60℃ | 60 sec（采集FAM信号） |
数据分析
定量：以Ct值对标准曲线计算样本浓度。
定性：Ct≤39为阳性，≥40为阴性；39–40间需复测。
样本保存与运输
短期保存：-20℃；长期保存：-70℃（≤6个月）。
运输条件：2–8℃冰袋，避免反复冻融。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行。
防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。
试剂保存：避光保存反应液，使用前充分混匀并离心。
局限性：
结果受样本质量、提取效率及运输条件影响。
基因突变可能导致假阴性；交叉污染可致假阳性。
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