嗜酸乳杆菌NCFM探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 嗜酸乳杆菌NCFM探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Lactobacillus acidophilus NCFM Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4656 |
预期用途
用于嗜酸乳杆菌NCFM核酸的定性或定量检测，适用于科研用途，不适用于临床诊断。检测结果需结合其他方法综合分析。
检验原理
基于TaqMan探针法实时荧光PCR技术，针对嗜酸乳杆菌NCFM基因保守区域设计特异性引物及探针。通过荧光信号实时监测扩增过程，实现高灵敏（最低检测限1.0×10³ copies/mL）和高特异性检测。
试剂组分
| 组分名称 | 规格 |
| 嗜酸乳杆菌NCFM反应液 | 975μL ×1管 |
| 嗜酸乳杆菌NCFM扩增液 | 25μL ×1管 |
| 阳性质控品（DNA片段） | 50μL ×1管 |
| 阴性质控品 | 50μL ×1管 |
| 说明书 | 1份 |
注意：不同批号组分不可混用，避免反复冻融（≤7次）。
储存与运输
储存条件：-20℃±5℃避光保存，有效期12个月。
运输：低温冰袋（2~8℃），严禁冻融。
适用仪器
兼容ABI、Bio-Rad、LightCycler、Eppendorf等主流荧光定量PCR仪。
样本要求
样本类型：全血、粪便、拭子、培养物等。
处理要求：
短期保存于-20℃，长期保存需-70℃（≤6个月）。
避免交叉污染，推荐使用商品化核酸提取试剂盒（如Hypure病毒基因组DNA提取试剂盒）。
操作步骤
样本DNA提取：按标准方法提取，建议使用带滤芯吸头。
试剂配制：
解冻后混匀离心，按N（样本数+2）配制反应体系（19.5μL反应液+0.5μL扩增液/反应）。
加样：每管加入5μL模板DNA或质控品。
PCR扩增：
循环参数：95℃ 3min预变性；40循环（95℃ 15s→55℃ 30s）。
荧光通道：FAM检测，无淬灭通道。
结果分析
阳性：Ct≤35.0且扩增曲线典型。
可疑：35.0<Ct≤38.0需复测。
阴性：无Ct值或非典型曲线。
质控要求：阴性对照无Ct值，阳性对照Ct≤30。
性能指标
阴阳性符合率：100%（5份阳性/10份阴性）。
精密度：批内/批间CV≤3%。
局限性
结果受样本质量、提取效率、运输条件及病原体变异影响。
污染可能导致假阳性，试剂失效或操作不当可致假阴性。
注意事项
分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。
使用无DNA/RNA酶耗材（离心管、吸头等）。
反应液避光保存，分装时避免气泡。
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