禽腺病毒（IV型）探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 禽腺病毒（IV型）探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Fowl Adenovirus Type IV Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4664 |
预期用途
本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，用于禽类样本中IV型禽腺病毒核酸的定性与定量检测。适用于科研用途，如流行病学调查、病毒载量监测及实验室研究。
检验原理
通过设计针对IV型禽腺病毒基因保守区的特异性引物及探针，在PCR扩增过程中释放荧光信号，利用实时荧光定量PCR仪监测信号强度，实现核酸的灵敏检测（检测限低至1×10^3拷贝/μL）。
试剂组成
禽腺病毒扩增液（25μL×1管）
禽腺病毒反应液（975μL×1管）
阳性质控品（50μL×1管，含1×10^6拷贝/μL病毒核酸）
阴性质控品（50μL×1管，无核酸酶水）
说明书（1份）
储存条件及有效期
-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。
适用仪器
兼容ABI系列、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等荧光定量PCR仪。
自备耗材与设备
无核酸酶离心管（0.2mL PCR管、1.5mL离心管）
滤芯吸头（10μL/200μL/1000μL）
离心机、振荡混匀器、移液器
样本要求
样本类型：
活体样本：全血、血清、粪便、呼吸道/肛门拭子。
病死禽：肠道组织、肝脏等。
保存与运输：
短期保存：-20℃；长期保存：-70℃（≤6个月）。
运输需使用2~8℃冰袋，避免反复冻融。
操作步骤
1. 核酸提取
推荐使用商品化病毒DNA提取试剂盒，提取后模板保存于-15℃以下。
2. 试剂配制
解冻试剂后混匀离心，按N（样本数+2质控）计算反应体系：
反应液：19.5μL/管
扩增液：0.5μL/管
分装至PCR管，加入5μL模板DNA（样本/质控）。
3. PCR扩增
程序设置：
预变性：95℃ 5分钟
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集荧光）
4. 数据分析
定量检测：以标准曲线（Ct值-log浓度）计算病毒载量。
定性检测：
阳性：Ct≤36，典型扩增曲线；
阴性：Ct≥40；
可疑值（36<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行。
防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。
质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤36。
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