鸭乙型肝炎病毒cccDNA 探针法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，专门用于检测鸭乙型肝炎病毒(cccDNA)。DHBV属于禽嗜肝DNA病毒属，是研究HBV的重要动物模型。本产品具有高灵敏度和高特异性，引物和探针针对DHBV cccDNA高度保守区域设计，可有效避免与其他病毒DNA的交叉反应。

主要特点

即开即用，用户只需提供样品DNA模板

引物和探针经过优化，灵敏度高

提供阳性质控品，便于区分假阴性结果

特异性强，不会与其他生物DNA发生交叉反应

适用于ABI、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad等主流荧光定量PCR仪

仅限科研使用

试剂盒组成

DHBV扩增液：25μL×1管

DHBV反应液：975μL×1管

DHBV阳性质控品：50μL×1管（10⁷拷贝/μL）

DHBV阴性质控品：50μL×1管

说明书：1份

样本要求

可检测样本类型：全血、血清、血浆、粪便、呼吸道分泌物、拭子样本等

样本采集后应及时检测，短期保存于-20℃，长期保存应置于-70℃以下

样本运输应采用2-8℃冰袋，严禁反复冻融

实验操作

样本DNA提取

推荐使用商品化病毒基因组DNA提取试剂盒，严格按照说明书操作。提取后的DNA如不立即使用，应保存于-15℃以下。

反应体系配制（20μL体系）

| 组分 | 体积 |

| DHBV反应液 | 19.5μL |

| DHBV扩增液 | 0.5μL |

| 样本DNA | 5μL |

PCR反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5min | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 15s | 35 |

| | 60℃ | 60s | (采集FAM通道信号) |

结果分析

基线设定

选择指数扩增前荧光信号稳定的区域，建议基线设为6-15个循环。

阈值设定

阈值线应刚好超过正常阴性质控品的扩增曲线最高点。

质控标准

阴性质控品：无指数扩增期，Ct=40或无Ct

阳性质控品：有明显指数扩增期，Ct≤35

以上条件需同时满足，否则实验无效

结果判读

阳性：有明显指数扩增期且Ct<38

可疑：有明显指数扩增期且38≤Ct<40

阴性：无指数扩增期或Ct≥40

注意事项

不同批号试剂不可混用

避免反复冻融（不超过7次）

操作时使用无核酸酶耗材

实验分区操作，防止污染

本产品仅用于科研，不适用于临床诊断

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