预期用途
用于制川乌核酸的定性或定量检测，适用于科研用途，不用于临床诊断。
产品名称 | 制川乌探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Aconitum carmichaelii Preparata Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4908 |
试剂盒组成
核心组分：
探针法qPCR缓冲液（500μL）
qPCR酶混合液（50μL）
荧光PCR专用模板稀释液（1mL）
引物-探针干粉（50T）
阳性对照（10^7拷贝/μL，50μL）
阴性对照（50μL）
其他：说明书、离心管等耗材（具体以实际包装为准）。
操作流程
1. 标准曲线制备（定量分析适用）
使用阳性对照进行10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），独立操作避免污染。
标记离心管（1–6号），依次加入稀释液和模板，涡旋混匀后冰上保存。
2. 样本DNA提取
推荐使用商品化DNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2样本）。
提取后DNA短期保存于-20℃，长期保存于-70℃。
3. qPCR反应体系（20μL）
反应液配制：
19.5μL反应液 + 0.5μL扩增液 + 5μL模板DNA。
循环参数：
预变性：95℃ 3min；
40循环：95℃ 15s → 60℃ 60s（采集FAM通道信号）。
4. 数据分析
定量检测：通过标准曲线计算样本拷贝数。
定性检测：
阳性：Ct≤39，典型扩增曲线；
阴性：Ct≥40或无扩增；
可疑（39<Ct<40）：需重复检测。
性能指标
灵敏度：最低检测限1.0×10^3 copies/mL。
特异性：仅扩增制川乌靶序列，无交叉反应。
精密度：批内/批间CV≤3%。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、PCR扩增需在独立区域进行。
防污染措施：使用滤芯吸头、穿戴防护装备，实验后消毒台面。
储存与运输：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次）；运输需冰袋（2–8℃）。
局限性：
结果受样本质量、提取方法及操作规范影响；
基因突变可能导致假阴性。
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关键字： 制川乌;探针法;PCR鉴定试剂盒;