产品介绍：
高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV-M)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 是一种专门用于体外定性检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, HP-PRRSV）核酸的分子诊断工具。
该试剂盒基于实时荧光定量RT-PCR技术（qRT-PCR），通常采用TaqMan探针法。它针对的是2006年在我国暴发的“高致病性猪蓝耳病”变异毒株（主要特征为NSP2基因的特定缺失）。与通用型试剂盒不同，该试剂盒具有高度的特异性，主要用于区分普通经典毒株和高致病性变异毒株，对于疫情的精准防控和流行病学调查具有重要意义。
产品名称 | 高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV-M)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3684 |
以下是关于该试剂盒的详细介绍：
检测原理与技术
该试剂盒利用实时荧光PCR原理，针对高致病性猪蓝耳病病毒的特异性基因序列（通常是NSP2基因的变异区域或高保守区域）设计特异性引物和探针。
靶标基因： NSP2基因（非结构蛋白2基因）。高致病性毒株（如JXA1株、HuN4株等）在NSP2基因上存在特征性的氨基酸缺失（如30个氨基酸的缺失），试剂盒正是利用这一特征序列进行设计，从而特异性地识别高致病性毒株，而不会与经典毒株或疫苗株发生交叉反应。
技术原理： 由于蓝耳病病毒是RNA病毒，试剂盒采用一步法RT-qPCR。
逆转录： 反应体系中的逆转录酶将样本中的病毒RNA逆转录为cDNA。
扩增与检测： 在PCR扩增过程中，特异性探针（通常标记为FAM荧光素）与目标序列结合并被酶切，释放出荧光信号。仪器实时监测信号变化，从而判断样本中是否存在高致病性PRRSV核酸。
内标系统： 试剂盒通常包含内源性内标（IC，标记为HEX/VIC或ROX），用于监控样本采集、核酸提取及PCR扩增过程是否正常，防止假阴性。
�� 核心性能指标
指标 参数 说明
检测样本 肺脏、脾脏、淋巴结、血清、全血 适用于临床病理组织及血液样本
检测下限 1×10³ copies/mL 灵敏度高，可检出微量病毒
特异性 强 不与经典PRRSV、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)等交叉反应
检测时间 约1.5 - 2小时 含RNA提取及RT-PCR扩增步骤
保存条件 -20℃ ±5℃ 避光保存，避免反复冻融
�� 典型操作流程
样本采集： 采集病死猪的肺脏、脾脏、淋巴结组织，或活猪的抗凝全血/血清。
核酸提取： 使用试剂盒配套的病毒RNA提取试剂（磁珠法或离心柱法）提取样本中的总RNA。
反应体系配制： 将提取的RNA模板、PCR反应液、酶混合物等按比例加入PCR反应管中。
上机扩增： 放入荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Roche LightCycler等）中运行程序。
结果判读：
阳性： FAM通道出现典型的S型扩增曲线，且Ct值 ≤ 35-40，表明样本中存在高致病性猪蓝耳病病毒核酸。
阴性： FAM通道无扩增曲线，或Ct值 > 40。
�� 临床与应用意义
精准分型： 核心价值在于区分“高致病性变异株”与“经典株/疫苗株”。高致病性毒株致死率高（可达50%-100%），准确检测有助于评估疫情严重程度。
疫情预警： 在猪群出现高热、皮肤发红、高死亡率等症状时，快速确诊是否为高致病性蓝耳病暴发。
防控决策： 鉴于高致病性毒株的强传染性和高致病力，检测结果直接影响猪场的生物安全措施升级、紧急免疫或扑杀方案的制定。
⚠️ 注意事项
用途限制： 市场上大多数此类产品明确标注“仅用于科研”或“实验室专用”，不作为临床诊断的唯一依据。
防污染： PCR实验室必须严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），操作人员需穿戴一次性手套和口罩，防止气溶胶污染导致的假阳性。
结果解读： 阳性结果表明存在高致病性PRRSV感染，必须立即上报当地兽医主管部门，并启动应急预案。阴性结果不能完全排除感染（如处于潜伏期或采样不当），需结合临床症状复核。
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通用操作流程与注意事项：
1. 样本制备
使用核酸提取试剂盒纯化DNA/RNA，需设置阳性、阴性对照。
关键点：避免交叉污染，阳性对照单独存放。
2. 反应体系配置
常规PCR：引物、dNTPs、Taq酶、模板DNA。
qPCR：需额外加入探针或染料。
3. 扩增程序
常规PCR：
预变性→循环扩增→延伸
qPCR：
预变性→循环扩增（荧光采集）
4. 结果判读
常规PCR：电泳观察条带大小（如阳性对照需出现预期条带）。
qPCR：Ct值≤35为阳性，阴性对照无信号。
关键字： 高致病性猪蓝耳病病毒;PRRSV-M ; 荧光PCR法;核酸检测试剂盒;
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