产品介绍:
包虫病(棘球蚴病)是一种严重的人畜共患病,在我国西部地区(如新疆、青海、四川等)流行较广。与传统的血清学检测(如ELISA)相比,荧光PCR法直接检测病原体的遗传物质,具有更高的特异性和灵敏度,常用于病原鉴定、分型以及环境样本(如犬粪)的检测。
产品名称 | 包虫病(hydatid disease)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3733 |
以下是该试剂盒的详细技术解析和应用说明:
1. 核心检测原理
该试剂盒通常采用TaqMan荧光探针法(探针法)。
靶点基因: 针对棘球蚴基因组中的保守序列设计引物和探针。常用的靶基因包括:
线粒体基因: 如 CO1(细胞色素氧化酶I)、ND1(NADH脱氢酶I)、12S rRNA。
核基因: 如 EmuR(泡型包虫病特异性)。
检测机制: 提取样本DNA后进行PCR扩增。若样本中含有棘球蚴DNA,探针被切割释放荧光信号(通常为FAM通道),仪器实时监测并判断结果。
2. 试剂盒的关键性能指标
高特异性: 能特异性检测细粒棘球绦虫(E. granulosus)或多房棘球绦虫(E. multilocularis),不与其它寄生虫(如囊尾蚴、蛔虫)发生交叉反应。
高灵敏度: 检测下限通常可达 10² - 10³ copies/mL,部分研究级产品灵敏度可达10 copies/μL。
分型能力: 通过设计针对不同种/株的特异性引物,可区分囊型包虫病(CE)和泡型包虫病(AE),这对临床治疗方案的选择至关重要。
3. 试剂盒组成(典型配置)
一个标准的50T(次)试剂盒通常包含以下组分:
组分名称 作用 保存条件
PCR反应液 含dNTPs、Mg²⁺、缓冲液、引物/探针 -20℃ 保存
酶混合液 含Hot Start Taq DNA聚合酶 -20℃ 保存
阳性对照 含棘球蚴靶基因的质粒或灭活虫体DNA -20℃ 保存
阴性对照 无核酸酶水 2-8℃ 保存
4. 适用样本类型
组织样本: 肝、肺等病变组织的细针穿刺活检物或手术切除物(最常用)。
粪便/肛拭子: 用于检测终末宿主(犬、狐)是否排虫。
体液: 包虫囊液(手术抽取)、血清(需注意,游离DNA在血清中含量极低,通常仅在囊肿破裂时可检出)。
5. 结果判读标准(参考)
阳性(+): FAM通道出现典型的S型扩增曲线,且 Ct值 ≤ 35-38(具体阈值依厂家说明书而定),表明样本中存在包虫病病原体核酸。
阴性(-): 无Ct值,或Ct值 > 38/。
可疑(±): Ct值在临界值附近,建议复检。
6. 临床与应用意义
病原分型: 准确区分囊型和泡型包虫病,泡型包虫病恶性程度高,需更积极的手术和药物治疗。
术后监测: 检测术后组织或体液中是否残留病原DNA,评估复发风险。
流行病学调查: 用于筛查疫区犬类的感染率。
PCR试剂盒的核心类型:
1. 常规PCR试剂盒
原理:通过引物扩增目标DNA片段,产物经琼脂糖电泳检测。
特点:操作简单、成本低,适用于定性检测(如牛疱疹病毒1型PCR试剂盒)。
典型应用:动物病原体筛查。
2. 荧光定量PCR(qPCR)试剂盒
探针法(TaqMan):
利用特异性探针结合目标序列,荧光信号实时监测扩增过程。
优势:高特异性(如牛白血病病毒试剂盒)、宽线性范围(10²–10⁷拷贝/μL)。
染料法(SYBR Green):
染料嵌入双链DNA发光,成本较低,但需优化引物特异性。
3. 恒温扩增试剂盒
技术:LAMP、RPA等,无需热循环仪,适合现场检测。
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关键字: 包虫病;hydatid disease;核酸检测试剂盒;荧光PCR;
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