商品属性
产品名称 | 脂质过氧化物（LPO）测试盒 | 产品货号 | BH-961152 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
脂质过氧化物（LPO）是细胞膜脂质被活性氧氧化的产物，是衡量氧化损伤程度的重要指标：氧化应激标记：直接反映生物膜脂质过氧化水平疾病关联：与动脉粥样硬化、心脑血管疾病、糖尿病、癌症、神经退行性疾病等密切相关环境胁迫响应：评估植物对干旱、盐渍、重金属等逆境的适应能力食品品质评价：反映油脂类食品的氧化程度和新鲜度
测定原理
采用硫代巴比妥酸（TBA）法，LPO的终产物丙二醛（MDA）与TBA在酸性条件下加热反应生成红色的MDA-TBA复合物： MDA+2TBA→酸性条件、加热MDA-TBA红色复合物MDA+2TBA酸性条件、加热MDA-TBA红色复合物 该复合物在532nm处有最大吸收峰，吸光度与MDA浓度成正比。
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂A 液体25mL×1瓶 含三氯乙酸-TBA混合液，蛋白质沉淀剂和显色剂
试剂B 液体10mL×1瓶 含0.2mol/L盐酸溶液，提供酸性反应环境
试剂C 液体10mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.4，用于样本提取
标准品 液体1mL×1支 含100μmol/L MDA标准品，用于建立标准曲线
提取液 液体100mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.4，用于样本提取
自备仪器与试剂
必备仪器
分光光度法：可见分光光度计、恒温水浴锅、台式高速离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿
HPLC法：高效液相色谱仪、紫外检测器、C18色谱柱
通用：-20℃冰箱、电子天平、漩涡混匀器、沸水浴装置
必备耗材
离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器、水浴锅
自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、抗凝剂（肝素/EDTA）
样本前处理方法
动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分按质量(g):提取液(mL)=1:5~10比例（建议0.1g组织加1mL提取液）冰浴匀浆8000g 4℃离心15min，取上清置冰上待测若LPO含量过高，可用提取液稀释1-5倍测定
细胞/细菌样本收集对数生长期细胞/细菌，8000g 4℃离心5min弃上清按细胞数(10⁴):提取液(mL)=500~1000:1比例加入提取液，冰浴超声破碎8000g 4℃离心15min，取上清置冰上待测
液体样本（血清/血浆/尿液/唾液/食品样本等）血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取上清直接测定血浆样本：加入肝素/EDTA抗凝后，3000g 4℃离心10min，取上清直接测定尿液/唾液：新鲜样本3000g 4℃离心10min，取上清直接测定或用生理盐水稀释食品样本：固体食品需研磨后用提取液提取，液体食品直接测定
测定操作步骤
分光光度法操作
试剂准备：
将试剂盒平衡至室温（20-25℃）
配制工作液：取试剂A 5mL + 试剂B 1mL，充分混匀
标准品稀释：将100μmol/L MDA标准品用提取液稀释成0、1、2、3、4、5μmol/L的标准系列
标准曲线建立：
取比色管，加入标准品溶液0.5mL + 工作液0.5mL
沸水浴中加热15min，立即冰浴冷却
8000g离心10min，取上清液在532nm波长下测定吸光度
以MDA浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线
样本测定：
分光光度计预热30min，532nm波长，蒸馏水调零
测定管：取比色管，加入样本0.5mL + 工作液0.5mL
空白管：取比色管，加入提取液0.5mL + 工作液0.5mL
沸水浴中加热15min，立即冰浴冷却
8000g离心10min，取上清液测定吸光度（A样、A空）
HPLC法操作
色谱条件：
色谱柱：C18柱（4.6×250mm，5μm）
流动相：甲醇-水（60:40，v/v）
流速：1.0mL/min
检测波长：532nm
柱温：30℃
进样量：20μL
样本前处理：
取样本0.5mL，加入TBA试剂0.5mL，沸水浴加热15min
冷却后用乙酸乙酯萃取，取有机相氮气吹干，用甲醇复溶
0.22μm滤膜过滤，进样分析
结果计算方法
单位定义
nmol/g鲜重：每克组织鲜重中LPO含量（以MDA计）
nmol/mL：每毫升样本中LPO含量（以MDA计）
分光光度法计算公式
LPO含量(nmol/g鲜重)=(A样−A空)×V总×D(A标−A空标)×C标×WLPO含量(nmol/g鲜重)=(A标−A空标)×C标×W(A样−A空)×V总×D
A样-A空：样本扣除空白后的吸光度值
V总：样本提取液总体积（mL）
D：样本稀释倍数（未稀释则为1）
A标-A空标：标准品扣除空白后的吸光度值
C标：标准品浓度（nmol/mL）
W：组织鲜重（g）
简化公式
按鲜重计算：LPO（nmol/g鲜重）= 100×(A样-A空)÷W
按液体体积计算：LPO（nmol/mL）= 100×(A样-A空)
HPLC法计算以外标法或内标法定量，根据标准品峰面积计算MDA含量LPO含量 = MDA含量 × 转换系数（通常LPO:MDA=1:1）
性能指标
指标 要求
线性范围 0~10nmol/mL，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.1nmol/L
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免LPO分解；-80℃可保存1个月
匀浆与超声破碎需在冰浴中进行，控制温度在0-4℃
样本需避免氧化，处理过程中尽量减少与空气接触
试剂使用：
TBA溶液对光敏感，配制后需避光保存
标准品需现配现用，避免MDA分解
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
沸水浴时间需严格控制在15min，避免显色过度
冷却需迅速，避免MDA-TBA复合物分解
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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