商品属性
产品名称 | 花青素还原酶（ANR）测试盒 | 产品货号 | BH-961182 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
花青素还原酶（ANR）是原花青素生物合成途径中的关键酶，具有重要的生理功能和应用价值：植物生理功能：催化花色素转变为相应的顺式黄烷-3-醇，参与原花青素生物合成颜色调控：影响植物花色、果色等色泽形成，调控植物外观品质抗逆能力：增强植物抗寒、抗旱、抗病虫害等逆境胁迫能力食品品质：改善果实口感，增加营养价值，提高食品抗氧化活性医药应用：原花青素具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种保健功能
测定原理
采用紫外分光光度法，NADPH在ANR作用下将花色素转化为黄烷-3-醇和NADP，在340nm下测定NADPH的减少速率，即可反映ANR活性。 花青素+NADPH→ANR黄烷-3-醇+NADP+花青素+NADPHANR黄烷-3-醇+NADP+
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂一 液体50mL×1瓶 含0.1mol/L pH5.5醋酸盐缓冲液，提供酶促反应环境
试剂二 粉剂×1瓶 含花色素苷底物，需临用前加入3mL蒸馏水溶解
试剂三 粉剂×1瓶 含NADPH（还原型辅酶II），需临用前加入1mL乙醇和1mL蒸馏水溶解
试剂四 液体2mL×1瓶 含终止液，终止酶促反应
提取液 液体30mL×1瓶 含缓冲液，用于植物样本提取
自备仪器与试剂
必备仪器
紫外分光光度计/酶标仪（340nm检测通道）
低温离心机（≥12000g）
恒温水浴锅/金属浴（控温精度±0.5℃）
可调式移液器（10-1000μL）
组织匀浆器/研钵
超声波破碎仪
必备耗材
1mL石英比色皿/96孔板
离心管（1.5mL、10mL）
一次性无菌吸头
自备试剂
蒸馏水/去离子水
无水乙醇
生理盐水
样本前处理方法
植物组织样本新鲜组织：准确称取0.1g植物组织，加入1mL提取液，冰浴匀浆细胞样本：收集500万细胞，加入1mL提取液，冰浴超声波破碎离心处理：12000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测样本稀释：若酶活性过高，用试剂一稀释1-10倍后测定
果实样本样本制备：取新鲜果实，去皮去核，称取0.5g果肉，加入2mL提取液匀浆处理：冰浴匀浆，60℃超声提取30min离心过滤：12000g 4℃离心10min，取上清液用0.45μm滤膜过滤样本保存：可直接检测或-80℃保存1个月，避免反复冻融
测定操作步骤
试剂配制试剂二配制：临用前将粉剂加入3mL蒸馏水溶解，可分装-20℃保存4周试剂三配制：临用前将粉剂加入1mL乙醇和1mL蒸馏水混匀溶解，可分装-20℃保存4周工作液配制：取试剂一850μL + 试剂二50μL + 试剂三25μL，混匀即为工作液
标准曲线建立将NADPH标准品用试剂一稀释成0、5、10、20、40、60、80μmol/L系列浓度取比色管，加入标准品溶液0.1mL + 试剂一0.9mL，340nm波长下测定吸光度以NADPH浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线
样本测定反应体系：取工作液975μL + 样本25μL，立即混匀吸光度测定：记录340nm处初始吸光值A1和30min后的吸光值A2，计算ΔA = A1 - A2空白对照：取试剂一975μL + 样本25μL，同样处理作为空白计算ΔA：ΔA = (A1-A2)样本 - (A1-A2)空白
酶标仪法操作取96孔板，加入工作液195μL + 样本5μL，立即混匀酶标仪340nm波长下连续测定30min，记录吸光度变化计算ΔA/Δt = (A初始 - A最终)/30min
结果计算方法
单位定义
U/mgprot：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol NADPH的酶量
U/g鲜重：每g组织每分钟消耗1nmol NADPH的酶量
U/10⁴cell：每10⁴个细胞每分钟消耗1nmol NADPH的酶量
计算公式
ANR酶活(U/mgprot)=ΔA×V反总ε×d×t×Cpr×V样×109ANR酶活(U/mgprot)=ε×d×t×Cpr×V样ΔA×V反总×109
ΔA：340nm处吸光度变化值
V反总：反应体系总体积（L）
ε：NADPH摩尔消光系数（6.22×10³ L/mol/cm）
d：比色皿光径（cm）
t：反应时间（min）
Cpr：样本蛋白浓度（mg/mL）
V样：样本加入体积（L）
简化公式
按蛋白计算：ANR酶活（U/mgprot）= 107.18 × ΔA ÷ Cpr
按鲜重计算：ANR酶活（U/g鲜重）= 107.18 × ΔA ÷ W
按细胞数计算：ANR酶活（U/10⁴cell）= 0.2144 × ΔA
性能指标
指标 要求
线性范围 0~100μmol/L NADPH，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.01U/mgprot
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免酶活性失活；-80℃可保存1个月
提取过程需在冰浴中进行，防止ANR失活
样本处理需避免光照，防止花色素苷降解
试剂使用：
NADPH溶液需现配现用，或分装-20℃避光保存
底物溶液需临用前配制，避免分解
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
反应时间需严格控制，保持线性范围内的吸光度变化
测定需在37℃（动物）或25℃（植物）条件下进行
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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