商品属性
产品名称 | 查尔酮异构酶（CHI）测试盒 | 产品货号 | BH-961183 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
查尔酮异构酶（Chalcone Isomerase，CHI）是黄酮类化合物生物合成途径中的关键酶，其测定具有重要的实际意义：植物生理研究：直接反映植物黄酮类化合物的合成能力植物抗逆性评估：与植物抗干旱、抗病虫害、抗盐碱等能力密切相关植物育种：作为选育高黄酮含量品种的指标食品工业：评估水果、蔬菜、茶叶等食品的品质和营养化妆品工业：评估植物提取物的抗氧化活性
测定原理
查尔酮异构酶催化查尔酮环化形成4,5,7-三羟基黄烷酮，通过测定381nm下的吸光度变化表示CHI的活性。 查尔酮→CHI4,5,7-三羟基黄烷酮查尔酮CHI4,5,7-三羟基黄烷酮 随着反应进行，381nm下的吸光度逐渐降低，吸光度下降速率与酶活性成正比。
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂A 液体60mL×1瓶 含0.1mol/L pH7.5 Tris-HCl缓冲液，提供酶促反应环境
试剂B 粉剂×1瓶 含查尔酮底物，用时加入20mL试剂A充分溶解待用
试剂C 液体60mL×1瓶 含提取液，用于植物样本提取
标准品 液体1mL×1支 含0.1U/mL CHI标准品，用于校准和验证
自备仪器与试剂
必备仪器
分光光度法：可见分光光度计（381nm检测通道）、1mL玻璃比色皿
酶标仪法：酶标仪（381nm检测通道）、96孔板
HPLC法：高效液相色谱仪、紫外检测器（254nm检测通道）
通用：低温离心机（≥8000g）、恒温水浴锅、可调式移液器、研钵/组织匀浆器
必备耗材
离心管（1.5mL、10mL）、一次性吸头、手术剪/镊子
自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水
样本前处理方法
植物组织样本取新鲜植物组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g组织，加入1mL提取液（试剂C），冰浴匀浆8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测若酶活性过高，用提取液稀释1-10倍后测定
微生物发酵液样本取发酵液8000g 4℃离心10min，取上清液作为粗酶液直接测定若酶活性过高，用提取液稀释1-10倍后测定样本可-20℃保存3个月，避免反复冻融
食品样本液态样本：如红酒、果汁，可直接测定，或用提取液稀释1-5倍固态样本：磨碎后加入5-10倍体积的提取液，搅拌均匀后过滤，取上清测定提取物：将提取物配制成一定浓度（如5mg/mL）的溶液后测定
测定操作步骤
分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至381nm，蒸馏水调零底物配制：取试剂B加入20mL试剂A，充分溶解后4℃保存样本测定：
取1mL玻璃比色皿，加入50μL样本上清液和950μL底物溶液，立即混匀
记录初始吸光值A1，37℃保温30min后记录吸光值A2
计算ΔA = A1 - A2（吸光度下降值）空白对照：用50μL提取液替代样本上清液，同样处理
微量法操作取96孔板，加入25μL样本上清液和225μL底物溶液，立即混匀记录初始吸光值A1，37℃恒温孵育30min后记录吸光值A2计算ΔA = A1 - A2空白对照：用25μL提取液替代样本上清液，同样处理
结果计算方法
单位定义
U/g鲜重：每克样本中，每小时催化降低0.1吸光度单位的酶量
U/mL：每毫升样本中，每小时催化降低0.1吸光度单位的酶量
U/mg蛋白：每毫克样本蛋白中，每小时催化降低0.1吸光度单位的酶量
计算公式
CHI活性(U/g鲜重)=ΔA×V反总×V样总(0.1×t×W×V样)CHI活性(U/g鲜重)=(0.1×t×W×V样)ΔA×V反总×V样总
ΔA：吸光度下降值（A1 - A2）
V反总：反应体系总体积（1.0mL）
V样总：样本提取液总体积（1.0mL）
t：反应时间（0.5h）
W：样本质量（g）
V样：样本加入体积（0.05mL）
简化公式
按鲜重计算：CHI活性（U/g鲜重）= ΔA × 400 ÷ W
按蛋白计算：CHI活性（U/mg蛋白）= ΔA × 400 ÷ Cpr
性能指标
指标 要求
线性范围 0~0.5U/mL，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.01U/mL
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免酶活性失活；-20℃可保存3个月
提取液需用pH7.5 Tris-HCl缓冲液，避免过酸或过碱影响酶活性
样本处理过程中需避免高温和光照，防止酶活性降低
试剂使用：
底物溶液需现配现用，4℃保存不超过3天
不同批号试剂不能混用，需重新验证酶活性
底物对光敏感，需避光保存
测定过程：
反应温度需严格控制在37℃，反应时间30min
需立即记录初始吸光度值，避免底物自发转化
若吸光度下降超过50%，需稀释样本后重新测定
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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