谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶（GOT/AST)测试盒

商品属性

测定意义与原理

测定意义

谷草转氨酶（GOT/AST）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化可逆转氨基反应，是氨基酸代谢的重要酶，其测定具有重要的临床和科研价值：临床诊断：评估肝功能，判断肝脏受损状况疾病监测：诊断和监测心肌梗塞、心肌炎等心脏疾病生物学研究：了解氨基酸代谢机制和细胞功能环境监测：检测水体和土壤中的酶活性，评估环境污染程度食品检测：检测食品中酶活性，判断食品质量

测定原理

GOT催化α-酮戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸；丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下显棕红色；测定505nm吸光度的变化，即可计算GOT酶活力。反应式如下： 天门冬氨酸+α-酮戊二酸→GOT谷氨酸+草酰乙酸天门冬氨酸+α-酮戊二酸GOT谷氨酸+草酰乙酸 草酰乙酸→丙酮酸+CO2草酰乙酸→丙酮酸+CO2 丙酮酸+2,4-二硝基苯肼→2,4-二硝基苯腙丙酮酸+2,4-二硝基苯肼→2,4-二硝基苯腙

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

试剂一 液体50mL×1瓶 含α-酮戊二酸溶液，酶反应底物

试剂二 液体25mL×1瓶 含天门冬氨酸溶液，酶反应底物

试剂三 液体25mL×1瓶 含2,4-二硝基苯肼溶液，显色剂

试剂四 液体50mL×1瓶 含氢氧化钠溶液，碱性显色条件

试剂五 液体10mL×1瓶 含标准品溶液，用于建立标准曲线

提取液 液体100mL×1瓶 含Tris-HCl缓冲液（pH8.0），用于提取样本中的GOT

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法：可见分光光度计（505nm检测通道）、1mL玻璃比色皿

微量法：酶标仪（505nm检测通道）、微量石英比色皿/96孔板

通用：电子天平（精度0.01g）、研钵/组织匀浆器、恒温水浴锅、可调式移液器

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、三氯乙酸

样本前处理方法

细菌、细胞或组织样品的制备取样：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；称取约0.1g组织，加入1mL提取液破碎：按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次)匀浆：组织按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例，进行冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测稀释：若GOT活性过高，用提取液稀释1-10倍后测定

血清(浆)样品采集：空腹采集静脉血，分离血清/血浆保存：4℃可保存3天，-20℃可保存1个月去蛋白：若样本浑浊，加入等体积去蛋白剂，混匀后10000g离心10min，取上清液

尿液样本采集：收集晨尿或随机尿稀释：用蒸馏水稀释10-20倍后测定保存：4℃可保存24h，-20℃可保存1个月

测定操作步骤

分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

取标准品用蒸馏水稀释成0、20、40、60、80、100U/L系列浓度

取5mL标准溶液于比色管中，加入2.5mL试剂一和2.5mL试剂二，混匀

37℃水浴反应30min，取出冷却至室温，加入2.5mL试剂三，混匀

室温放置10min，加入2.5mL试剂四，混匀，室温放置10min

以蒸馏水为参比，测定505nm波长下的吸光度，绘制标准曲线样品测定：

取适量样品溶液，按标准曲线步骤操作，测定吸光度

根据标准曲线计算样品中GOT活性

微量法操作仪器预热：酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

取标准品用蒸馏水稀释成0、20、40、60、80、100U/L系列浓度

取100μL标准溶液于96孔板中，加入50μL试剂一和50μL试剂二，混匀

37℃水浴反应30min，取出冷却至室温，加入50μL试剂三，混匀

室温放置10min，加入50μL试剂四，混匀，室温放置10min

以蒸馏水为参比，测定505nm波长下的吸光度，绘制标准曲线样品测定：

取100μL样品溶液，按标准曲线步骤操作，测定吸光度

根据标准曲线计算样品中GOT活性

结果计算方法

单位定义

U/L：每升样本每分钟催化生成1μmol丙酮酸的酶量

U/g 鲜重：每克鲜重样本每分钟催化生成1μmol丙酮酸的酶量

U/g 干重：每克干重样本每分钟催化生成1μmol丙酮酸的酶量

计算公式

GOT活性(U/L)=(A测定−A空白)×C标×V总(A标准−A空白)×V样×t×1000GOT活性(U/L)=(A标准−A空白)×V样×t×1000(A测定−A空白)×C标×V总

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

A标准：标准管吸光度值

C标：标准品浓度（U/L）

V总：样本提取液总体积（mL）

V样：样本体积（mL）

t：反应时间（min）

简化公式

当反应时间30min，标准品浓度100U/L时： GOT活性(U/L)=(A测定−A空白)×100×V总(A标准−A空白)×V样×30×1000GOT活性(U/L)=(A标准−A空白)×V样×30×1000(A测定−A空白)×100×V总

性能指标

指标 要求

线性范围 0~200U/L

最低检测限 ≤5U/L

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤3.0%

批间精密度 CV≤5.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免GOT失活；-20℃可保存3个月

血清样本需避免溶血和脂血，避免干扰测定结果

组织样本需洗净表面血液，避免污染

试剂使用：

试剂三需现配现用，避免2,4-二硝基苯肼分解失效

试剂四需避光保存，避免氢氧化钠吸收二氧化碳

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃，反应时间30分钟

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

若吸光度值低于检测限，需增加样本浓度后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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