还原糖含量测试盒
测定意义
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,植物体内主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等。这类物质不仅是呼吸作用的主要底物,也是合成蔗糖、淀粉和纤维素等生物大分子的基础原料,其含量变化可直接反映生物体的代谢状态。
测定原理
在加热条件下,碱性溶液中的3,5-二硝基水杨酸(DNS)与还原糖发生氧化还原反应,生成棕红色的氨基化合物。该产物在540nm波长处有特征吸收峰,且在一定浓度范围内,还原糖含量与吸光度值呈线性正相关。通过绘制标准曲线,即可计算出样品中的还原糖含量。
自备仪器与用品
可见分光光度计/酶标仪
恒温水浴锅(可稳定控制100℃)
可调式移液器(10-1000μL)及配套枪头
1mL玻璃比色皿/96孔板
研钵/组织匀浆器
高速离心机(可选,用于样本前处理)
蒸馏水/去离子水样本前处理方法
1. 植物组织样本
称取0.1g新鲜植物组织(叶片、根系、果实等),置于研钵中
加入1mL提取液,冰浴研磨成匀浆
转移至离心管,8000rpm离心10min,取上清液待测
2. 微生物/细胞样本
收集1×10^8个细胞,加入1mL提取液
超声破碎(功率200W,工作3s停5s,共30次)
8000rpm离心10min,取上清液待测
3. 体液样本
直接取血清/血浆样本,无需前处理,若浓度过高可适当稀释
操作步骤
1. 标准曲线绘制
管号 标准溶液(μL) 蒸馏水(μL) 还原糖浓度(mg/mL)
0 0 200 0
1 20 180 0.1
2 40 160 0.2
3 60 140 0.3
4 80 120 0.4
5 100 100 0.5
向各管加入200μL DNS试剂,沸水浴加热5min,立即冰水浴冷却至室温,再加入600μL蒸馏水,摇匀后于540nm波长处测定吸光度值。以吸光度为纵坐标,还原糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
2. 样品测定
取200μL待测样品(若浓度过高需适当稀释)
加入200μL DNS试剂,沸水浴加热5min
冰水浴冷却后加入600μL蒸馏水,摇匀
于540nm波长处测定吸光度值,根据标准曲线计算还原糖浓度
结果计算
还原糖含量(mg/g鲜重)= (C×V×N) / W
C:从标准曲线中查得的还原糖浓度(mg/mL)
V:提取液总体积(mL)
N:样品稀释倍数
W:样本鲜重(g)
注意事项
正式测定前建议取2-3个预期差异较大的样本做预测定,确定合适的稀释倍数沸水浴时间需严格控制5min,过长或过短都会影响结果准确性若溶液倒入比色皿后出现浑浊,建议将样品8000rpm离心5min后再测定若分光光度计数据波动较大,可预热仪器10min后再进行测定
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