人Ⅱ型肺泡上皮细胞

人Ⅱ型肺泡上皮细胞

产品信息：

产品名称 人Ⅱ型肺泡上皮细胞

组织来源 肺组织

默认种属 人，其他咨询

产品规格 5×10^5Cells/T25

培养信息：

自备试剂： 0.25%胰蛋白酶 、鼠尾胶原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾胶原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL） 、PBS、完全培养

基

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

细胞简介 ：

人Ⅱ型肺泡上皮细胞分离自肺组织；肺泡由单层上皮细胞构成的半球状囊泡。肺中的支气管经多次反

复分枝成无数细支气管，它们的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即为肺泡。小肺泡细胞，又称I

型肺泡细胞，厚约0.1微米，基底部是基底膜，无增殖能力。大肺泡细胞，又称Ⅱ型肺泡细胞，分泌表面活性物

质（二棕榈酰卵磷脂），以降低肺泡表面张力。Ⅱ型肺泡细胞位于Ⅰ型肺泡细胞之间，数量较Ⅰ型肺泡细胞多，

但覆盖面积比Ⅰ型肺泡细胞小。细胞立方形或圆形,顶端突入肺泡腔。细胞核圆形，胞质着色浅、呈泡沫状。电镜

下，细胞游离而有少量微绒毛，胞质内富含线粒体和溶酶体，有较发达的粗面内质网和高尔基复合体。核上方有

较多的分泌颗粒，电子密度高、大小不等，直径约0.1-1.0 μm颗粒内含有平行排列的板层状结构，称为嗜饿性板

层小体。小体内的主要成分为磷脂，以二棕榈酰卵磷脂为主，此外还有糖胺多糖及蛋白质等。颗粒内物质释放出

来后，在肺泡表面形成一层粘液层，称为表面活性物质（surfactant）。表面活性物质有降低肺泡表面张力、稳

定肺泡大小的作用。呼气时肺泡缩小，表面活性物质密度增加，表面张力降低，防止肺泡过度塌陷；吸气时肺泡

扩张，表面活性物质密度减小，肺泡回缩力加大，可防止肺泡过度膨胀。表面活性物质的缺乏或变性均可引起肺

不张，过度通气可造成表面活性物质缺乏；吸入毒气可直接破坏表面活性物质。Ⅱ型肺泡细胞有分裂、增殖并分

化为Ⅰ型肺泡细胞的潜能，故具有修复受损伤上皮的作用。

方法简介 实验室分离的人Ⅱ型肺泡上皮细胞采用弹性蛋白酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells

/瓶。

质量检测 实验室分离的人Ⅱ型肺泡上皮细胞经SP-C免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、

HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养与传代操作要点：

1‌、使用专用培养基‌

建议使用配套的原代上皮细胞专用培养基，添加2% FBS及生长因子，以维持细胞增殖与分化能力。

‌2、控制胰酶消化时间‌

使用0.25%胰蛋白酶消化时，时间不宜超过3分钟，显微镜下观察细胞变圆即可终止消化。过度消化会损伤细胞膜

，影响贴壁与生长。

‌3、传代比例与频率‌

原代人Ⅱ型肺泡上皮细胞传代能力有限，通常可传1–2代，推荐按1:2至1:3比例传代，每周换液2次。

‌4、包被培养器皿‌

转移细胞至爬片、共聚焦皿等实验装置前，需对器皿进行包被处理，常用鼠尾胶原Ⅰ（2–5 μg/cm²）或PLL

（0.1 mg/mL）增强贴壁性。

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细胞分离步骤：

‌一、组织处理‌

在无菌条件下，将肺组织移入预冷PBS中冲洗，去除气管、支气管和小血管等非肺泡组织；

剪碎成约1 mm³的小块，用冷PBS反复漂洗至液体澄清。

二、酶消化法‌

加入0.25%胰酶，37℃恒温震荡水浴消化25–35分钟；

添加含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基终止消化，吹打均匀后经200目金属滤网过滤；

800 rpm离心5分钟，弃上清，加入混合胶原酶继续消化15–20分钟，再次离心收集细胞沉淀。

三、纯化方法‌

‌密度梯度离心‌：使用Percoll或Ficoll不连续梯度离心，利用细胞沉降系数差异分离ATⅡ细胞；

‌差速贴壁法‌：先让巨噬细胞贴壁，取未贴壁细胞进行后续培养；

‌磁珠分选‌：通过特异性抗体结合磁珠，实现高纯度分离。