产品介绍:
预期用途
本试剂盒主要用于水稻及其加工产品中转基因成分的定性检测。
检测目标:转基因水稻KMD1品系。该品系转入了Cry1Ac基因,对鳞翅目害虫(如二化螟、三化螟)具有高抗性。
产品名称 | 转基因水稻品系KMD核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 货号 | AP3451 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 48T |
应用领域:
种子与植株鉴定:用于农业科研及种子质量检测,确认水稻种子或植株是否为KMD1品系。
食品与饲料安全:检测市售大米、米粉、米制品、植食性饲料等是否含有KMD1成分,确保符合转基因标识法规。
�� 检测原理
该试剂盒采用实时荧光定量PCR法(TaqMan探针法)。
技术核心:针对KMD1品系特有的侧翼序列(外源基因插入位点与水稻基因组的连接区域)设计特异性引物和探针。
信号产生:PCR扩增时,Taq酶会降解与模板结合的TaqMan探针(两端标记有荧光基团),释放出荧光信号。
结果判定:通过实时荧光PCR仪监测荧光信号的累积情况,依据扩增曲线和Ct值判断样品中是否含有KMD1品系。
�� 目标品系背景:KMD1
研发背景:中国自主研发的抗虫转基因水稻。
性状:抗虫(对鳞翅目害虫有效)。
基因来源:转入了苏云金杆菌(Bt)的Cry1Ac基因。
重要性:作为中国具有代表性的转基因水稻品系之一,其检测对于生物安全监管和市场标识合规性至关重要。
�� 核心优势
高特异性:直接检测品系特异的侧翼序列,能精准区分KMD1品系与其他转基因水稻品系(如Bt63、Kefeng6等)。
高灵敏度:检测下限极低,通常可达 0.1% 的转基因含量,甚至能检测到单拷贝基因。
定性准确:通过扩增曲线的形态(S型曲线)和Ct值进行判断,结果客观、准确。
内参对照:通常检测体系会同时包含水稻内源基因(如SPS或Actin基因)的检测,用于验证DNA提取质量及排除假阴性。
⚙️ 操作流程概览
样本前处理与核酸提取:从待测水稻样品(叶片、种子、米粉等加工品)中提取总基因组DNA。
反应体系配制:将试剂盒中的预混液(含引物、探针、酶等)与提取的DNA模板在冰上混合配制。
上机扩增:将反应体系放入实时荧光PCR仪中,设置好程序(通常包括预变性95℃ 10分钟,随后40-45个循环的95℃ 15秒、60℃ 1分钟)。
结果判读:
阳性(含KMD1):FAM通道扩增曲线呈明显的“S”型,且Ct值 ≤ 40。
阴性(不含KMD1):无扩增曲线,或Ct值 ≥ 45,或曲线为直线。
可疑/需复检:Ct值在 40-45之间 且呈S型曲线,建议重复实验。
⚠️ 注意事项与局限性
防污染:必须严格分区操作(试剂准备区、样本制备区、扩增区),防止气溶胶污染导致假阳性。
DNA质量:样品中残留的PCR抑制剂(如多糖、多酚)或DNA降解可能导致假阴性结果。
仪器依赖:必须使用带有荧光检测功能的实时荧光定量PCR仪。
储存条件:试剂盒通常需在-20℃条件下避光保存,避免反复冻融。
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应用场景与产品选择建议
科研领域:
常规PCR试剂盒。
临床诊断:
探针法qPCR试剂盒(如牛白血病病毒,灵敏度100拷贝/反应)。
现场检测:
恒温扩增试剂盒(如LAMP法,90分钟出结果)
关键字: 转基因水稻品系;KMD;核酸检测试剂盒;PCR-荧光探针法;
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