土豆内源基因核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

产品介绍：

检测原理与核心优势

该试剂盒采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术，具体为TaqMan荧光探针法。

核心原理：针对马铃薯基因组中高度保守的内源基因（例如尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因 UGP，或天冬酰胺合酶-1基因 Asn1）设计特异性引物和TaqMan探针。在PCR扩增过程中，随着马铃薯DNA的指数级扩增，探针被特异性切断，荧光信号随之释放并被仪器实时捕捉。

内参作用：如果马铃薯内源基因检测为阴性，说明DNA提取失败或样本中不含马铃薯基因组，此时即使目标基因（如转基因成分）检测为阴性，也不能判定为“非马铃薯来源”。

主要优势：

高特异性：引物和探针针对马铃薯特有序列设计，不会与其他植物（如玉米、大豆、小麦）发生交叉反应。

高灵敏度：检出限通常可达 0.1%（相对于总DNA），能够检测出极低含量的马铃薯成分。

广谱性：适用于各类样本，包括新鲜植株、深加工食品（如薯片、薯条）、饲料等。

�� 产品性能指标

根据相关产品信息，该试剂盒通常具备以下指标：

指标项目  性能参数参考

检测范围  2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  0.1% (w/w) 或 1×10³ 拷贝/毫升

反应体系  20-25 μL

适用仪器  ABI 7500, Bio-Rad CFX96, Roche 480, Mx3005P, LineGene9600等实时荧光定量PCR仪

适用样本  马铃薯植株、薯块、米粉、面粉、豆制品、罐头食品、薯类膨化食品、植食性饲料等。

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以48T规格为例）：

qPCR Mix：包含反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、Taq酶等。

引物探针混合液：针对马铃薯内源基因（如 UGP 或 Asn1）设计的特异性引物和探针。

阳性对照 (PC)：含有马铃薯内源基因片段的质粒或标准DNA。

阴性对照 (NC)：无模板对照（NTC）。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存，有效期通常为 1年。运输过程需使用干冰或冰袋，避免反复冻融。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的马铃薯组织、种子或加工食品样本。

使用CTAB法或商品化的植物基因组DNA提取试剂盒，提取样本的基因组DNA作为模板。

试剂准备

将试剂完全解冻，各组分在使用前需涡旋混匀，并瞬时离心。

反应体系配置

在冰上操作，按说明书比例配制反应体系（通常为20-25 μL）。

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入荧光定量PCR仪中。

设置好荧光通道（通常为FAM）、反应程序并运行。

结果判读

阳性：Ct值 ≤ 36，且扩增曲线呈典型的“S”型增长。说明样本中含有马铃薯源性成分。

阴性：Ct值 ≥ 40，曲线为直线或轻微斜线，无“S”型扩增曲线。说明样本中不含有马铃薯成分或含量低于检出限。

⚠️ 注意事项

防止污染：实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。反应结束后严禁开盖，应直接丢弃入密封袋中处理。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

公司正在出售的产品：

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。