传代方法 | 第一次建议1:2传代 | 冻存条件 | 细胞库无血清冻存液 |
细胞描述 | STR鉴定正确 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 THLE-2 是从供体左叶分离的上皮细胞，TTHLE-2 ( ATCC CRL-2706和 THLE-3 ( ATCC CRL-11233 ) 细胞系是通过感染 SV40 大 T 抗原从原代正常肝细胞中获得的。[RF84749] 该病毒是通过引入含有将SV40 T抗原的Bgl I-Hpa I片段导入两性包装细胞系PA317。[RF84750] THLE-2 和 THLE-3 细胞表达正常成人肝上皮细胞的表型特征。当注射到无胸腺裸鼠体内时，它们不会产生肿瘤，具有接近二倍体的核型，并且不表达甲胎蛋白。[RF84750] THLE-2 和 THLE-3 细胞将苯并[a]芘、N-亚硝基二甲胺和黄曲霉毒素 B1 代谢为其最终致癌代谢物，这些代谢物会加合 DNA，这表明功能性细胞色素 P450 途径。[RF84750] 其他参与化学致癌物代谢的酶，例如环氧化物水解酶、NADPH 细胞色素 P450 还原酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽 S-转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶也被 THLE 细胞保留。
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培养备注 | 完全培养基配置：BEGM from Lonza/Clonetics Corporation, Walkersville, MD 21793 (BEGM Bullet Kit; CC3170). The kit includes 500 mL basal medium and separate frozen additives from which we discard the gentamycin/ Amphot， 建议同时购买完培，同时购买有优惠 1、及时更换专用培养基
2、培养瓶（皿）需要提前使用 I 型胶原蛋白包被
3、该细胞生长速度较慢 |
细胞收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）
细胞培养步骤
一、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞冻存：（注：非无血清冻存液方法，无血清冻存液方法请参考我司官网货号：C7001）
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。
文献参考： 文章标题：Circ_0015756 Aggravates Hepatocellular Carcinoma Development by Regulating FGFR1 via Sponging miR-610
影响因子：3.3
期刊：Cancer Management and Research
作者列表：Weisheng Guo, Lin Zhao, Guangya Wei, Peng Liu, Yu Zhang, Liran Fu
发表时间：2023-1-30
DOI:10.2147/CMAR.S262231
关键字： 人正常肝细胞;THLE-2细胞;ATCC细胞引种;ATCC细胞代购;雅吉细胞库;
上海雅吉生物科技的核心业务主要围绕生命科学研究所需的各类试剂、细胞、抗体及技术服务展开，具体可归纳为以下几个方面：
细胞产品与技术平台：
细胞产品：提供包括正常细胞、肿瘤细胞、肿瘤耐药细胞在内的多种细胞系。同时，公司也是美国ScienCell等品牌的原代细胞产品的代理商。
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