产品介绍:
H16亚型流感病毒核酸检测试剂盒是一种基于多重荧光RT-PCR技术的分子诊断工具,专门用于检测野生水禽(尤其是鸥类)及环境样本中的H16亚型流感病毒核酸。
产品名称 | H16 亚型流感病毒核酸检测试剂盒 |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3048 |
检测原理
该试剂盒采用多重荧光RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)技术,通常基于TaqMan探针法。其核心设计为三靶标系统,能够同时检测并确认病毒的存在:
H16-HA基因检测:针对H16亚型流感病毒特有的血凝素基因设计引物和探针(通常标记FAM荧光素),用于特异性识别H16亚型。
N3-NA基因检测:针对常见的鸥类源神经氨酸酶N3亚型设计引物和探针(通常标记HEX/VIC荧光素)。这是因为H16亚型常与N3亚型在野生鸥类中共同流行。
通用A型流感检测(内参):针对所有A型流感病毒共有的保守基因(如M基因)设计引物和探针(通常标记ROX/CY5荧光素),用于确认样本中是否存在A型流感病毒感染,作为内部质控。
核心组成
试剂盒通常包含以下关键组分:
PCR反应液:含缓冲液、dNTPs、特异性引物和荧光标记探针。
酶混合液:含逆转录酶和热启动Taq DNA聚合酶。
阳性对照:含有H16、N3及M基因目标片段的质粒或假病毒混合物。
阴性对照:无核酸酶的水或缓冲液。
适用样本与操作流程
适用样本类型:
野生水禽样本:主要针对鸥类等野生鸟类的咽喉拭子、泄殖腔拭子。
环境样本:湖泊、湿地等环境中的水样或鸟类排泄物涂抹样本。
标准操作流程:
样本采集与处理:采集拭子或环境样本,置于病毒保存液中。
病毒RNA提取:使用病毒RNA提取试剂盒提取总RNA。
体系配置:将提取的RNA、PCR反应液和酶液按比例混合。
上机扩增:在荧光定量PCR仪上运行程序(通常包括逆转录、预变性和扩增循环)。
结果分析:根据扩增曲线的Ct值和荧光通道判定结果。
�� 结果判读标准
阳性:通用A型流感(M基因)检测为阳性,且H16-HA基因检测也为阳性(CT值通常小于38,且有明显的指数扩增期)。
阴性:通用A型流感检测为阴性,或H16-HA基因检测为阴性。
可疑:CT值在38-40之间,或扩增曲线不典型,需复测确认。
✨ 产品特点
高特异性:专门针对H16亚型设计,与其他流感病毒亚型(如H5、H7、H9)无交叉反应。
高灵敏度:最低检测限通常可达 1×10³ copies/mL,能够检出极低浓度的病毒。
生态针对性:特别针对野生水禽(鸥类)中的H16/N3病毒谱系设计,适用于野生动物疫病监测和病毒库研究。
⚠️ 注意事项与储存
储存条件:试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存,避免反复冻融。
有效期:通常为12个月(具体以包装盒标签为准)。
防污染:必须严格分区操作(试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区),防止气溶胶污染。
生物安全:操作野生样本时需注意生物安全防护。
�� 应用意义
野生动物监测:用于监测野生水鸟(特别是鸥类)中H16亚型流感病毒的流行情况。
生态学研究:H16亚型是禽流感病毒重要的生态谱系成员,对其进行监测有助于了解病毒在自然界的遗传多样性和进化规律。
基因重组风险预警:由于H16具有独特的血凝素特征和潜在基因重组风险,监测其变异对于评估跨物种传播风险具有重要意义。
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注意事项:
1、严防污染
分区操作:必须在独立的生物安全柜内进行样本处理、试剂配制和加样,避免气溶胶交叉污染。
专用耗材:使用无核酸酶的枪头、EP管等,建议使用带滤芯枪头。
规范操作:加样后立即盖紧管盖,避免试剂外溅。
2、保证质量
样本处理:样本采集后应立即冷藏(2-8℃),长期保存需置于-70℃以下,避免反复冻融。
试剂保存:严格按照说明书要求的温度(通常是-20℃或2-8℃)保存试剂,避免反复冻融。
对照设置:每次实验必须设置阳性对照、阴性对照和空白对照,监控实验有效性。
3、注意安全
生物安全:阳性样本需按生物安全三级标准处理,实验人员需佩戴个人防护装备(PPE)。
废弃物处理:所有废弃物(包括耗材、样本)需经121℃高压灭菌30分钟后方可丢弃
关键字: H16 ;亚型流感病毒;检测试剂盒;
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