产品介绍：
呼吸道合胞病毒 B 组（RSV-B）核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测呼吸道样本中呼吸道合胞病毒 B 型核酸的分子诊断产品。该试剂盒通常基于实时荧光 RT-PCR 技术或普通 RT-PCR 技术，能够快速、特异地识别病毒 RNA。
产品名称 | 呼吸道合胞病毒 B 组核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3065 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
检测原理
该试剂盒的核心原理主要是 RT-PCR（逆转录-聚合酶链式反应） 或 RT-LAMP（逆转录-环介导等温扩增）。
RT-PCR 原理（主流）：
逆转录（RT）：将提取的病毒 RNA 逆转录为 cDNA。
PCR 扩增：针对 RSV-B 的保守基因序列（如 G 基因或 L 基因）设计特异性引物和探针（TaqMan 探针），进行荧光定量检测。
结果判读：若样本中存在 RSV-B 病毒核酸，荧光信号会随着扩增循环数的增加而增强，仪器根据 Ct 值判定结果。
RT-LAMP 原理（部分产品）：
在恒温条件下（如 60-65℃）进行扩增，无需热循环仪，扩增后通常通过电泳或浊度变化观察结果。
核心组成
以常见的荧光 PCR 试剂盒（50 次/盒）为例，通常包含：
PCR 反应液：含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、特异性引物和探针。
酶混合液：含逆转录酶和 DNA 聚合酶（Taq 酶）。
阳性对照：含 RSV-B 目标基因片段的质粒或假病毒（通常为 1×10⁸ 拷贝/μL）。
阴性对照：无核酸酶的水。
核酸释放剂（部分赠送）：用于快速裂解样本释放核酸。
适用样本与操作流程
适用样本类型：
鼻咽拭子（最常用）
咽拭子
痰液
支气管肺泡灌洗液
鼻咽吸取物
标准操作流程：
样本采集：使用专用采样管采集呼吸道分泌物。
病毒 RNA 提取：使用病毒 RNA 提取试剂盒提取总 RNA（部分快速试剂盒可使用煮沸法或核酸释放剂直接处理）。
体系配置：将 RNA 模板、反应液、酶液混合。
上机扩增：在荧光定量 PCR 仪上运行程序（通常包括逆转录、预变性和扩增循环）。
结果分析：根据扩增曲线和 Ct 值判定阴阳性。
✨ 产品特点
高特异性：专门针对 RSV-B 亚型设计，与 A 亚型（RSV-A）及其他呼吸道病毒（如流感病毒、腺病毒）无交叉反应。
高灵敏度：最低检测限通常可达 10³ - 10⁴ 拷贝/毫升，能够检出早期或低载量感染。
临床分型意义：RSV 分为 A、B 两个亚型，B 亚型常与特定的流行季节和疾病负担相关，分型检测有助于流行病学研究和精准诊疗。
⚠️ 注意事项与储存
储存条件：试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存，避免反复冻融。
有效期：通常为 12 个月。
防污染：必须严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、PCR 扩增区），防止气溶胶污染导致假阳性。
样本质量：RSV 病毒在外界环境中极易失活，样本采集后应尽快送检，避免反复冻融。
�� 应用意义
临床诊断：辅助诊断由 RSV-B 引起的婴幼儿毛细支气管炎、肺炎及老年人呼吸道感染。
鉴别诊断：RSV 感染症状与普通感冒、流感相似，核酸检测是确诊的金标准。
流行病学监测：区分 RSV-A 和 RSV-B 的流行趋势，为疫苗研发和公共卫生防控提供数据支持。
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操作步骤：
整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑，核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。
提取：采用磁珠法或离心柱法提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。
保存：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备：在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系：例如，使用20μL体系的试剂盒，可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL（具体体积请以实际说明书为准）。
分装：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如20μL/管）。
加样：在样本处理区，分别向反应管中加入5μL的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。盖紧管盖，短暂离心，避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：
逆转录：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。
预变性：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。
扩增循环：通常为40个循环，每个循环包括变性（95℃，15秒） 和 退火/延伸（60℃，45秒），仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。
结果判定：
阳性：样本Ct值 ≤ 37（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性：样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效：阳性对照无Ct值或Ct值 > 35，或阴性对照有Ct值，需重新检测。
关键字： 呼吸道合胞病毒; B 组;检测试剂盒;
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