产品介绍:
流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae, HI)核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测流感嗜血杆菌核酸的分子诊断工具。该试剂盒主要基于实时荧光PCR技术(探针法)或普通PCR技术,能够快速、特异地识别临床样本中是否存在流感嗜血杆菌的DNA。
产品名称 | 流感嗜血杆菌核酸检测试剂盒 |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3084 |
检测原理
该试剂盒的核心原理主要分为两种:
实时荧光PCR法(主流)
原理:基于TaqMan探针法。针对流感嗜血杆菌的特异性基因(如蛋白D基因、b型荚膜多糖基因(bexA)或16S rRNA基因)设计引物和探针。
过程:提取样本DNA后,在PCR仪中进行扩增。若样本中存在目标DNA,荧光探针会被Taq酶分解并释放荧光信号(通常为FAM通道),仪器实时监测信号变化绘制扩增曲线,根据Ct值判读结果。
普通PCR法(电泳法)
原理:基于常规聚合酶链式反应。扩增特定的目的条带,反应结束后需通过琼脂糖凝胶电泳观察条带大小来判断结果。
核心组成
以常见的荧光PCR试剂盒(50次/盒)为例,通常包含:
PCR反应液:含缓冲液、dNTPs、特异性引物和荧光探针。
酶混合液:含热启动Taq DNA聚合酶(部分含UNG酶以防污染)。
阳性对照:含流感嗜血杆菌目标基因片段的质粒或灭活菌液。
阴性对照:无核酸酶的水。
核酸释放剂(部分赠送):用于快速裂解细菌释放DNA。
适用样本与操作流程
适用样本类型:
呼吸道样本:咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液(BALF)。
无菌体液:脑脊液、胸水(用于诊断脑膜炎、胸膜炎等侵袭性感染)。
标准操作流程:
样本前处理:
拭子/痰液:需经消化液(如痰消化液)处理或煮沸裂解。
体液:通常直接离心取沉淀进行处理。
DNA提取:使用试剂盒自带的核酸提取试剂或核酸释放剂提取模板DNA。
体系配置:将DNA模板、PCR反应液和酶液按比例混合。
上机扩增:在荧光定量PCR仪上运行程序(通常包括预变性、扩增循环)。
结果分析:根据扩增曲线和Ct值判定结果(如Ct≤38判为阳性)。
✨ 产品特点
高特异性:专门针对流感嗜血杆菌设计,与其他呼吸道常见菌(如肺炎链球菌、卡他莫拉菌)无交叉反应。
高灵敏度:最低检测限通常可达 10³ copies/mL,能够检出微量细菌。
快速诊断:相比传统的细菌培养(需24-48小时且受抗生素使用影响),PCR法可在数小时内出结果,且不受前期抗生素治疗影响。
⚠️ 注意事项与储存
储存条件:试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存,避免反复冻融(尤其是酶液)。
有效期:一般为12个月。
防止污染:必须严格分区操作(试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区),防止气溶胶污染导致假阳性。
结果解读:阳性结果需结合临床症状判断是定植还是感染,尤其是在上呼吸道样本中。
�� 应用意义
临床诊断:辅助诊断由流感嗜血杆菌引起的社区获得性肺炎、中耳炎、鼻窦炎及脑膜炎(尤其是b型)。
鉴别诊断:流感嗜血杆菌感染症状与其他细菌或病毒性呼吸道感染相似,核酸检测有助于精准鉴别。
耐药监测基础:快速确诊有助于合理使用抗生素,减少广谱抗生素的滥用。
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注意事项:
1、严防污染
分区操作:必须在独立的生物安全柜内进行样本处理、试剂配制和加样,避免气溶胶交叉污染。
专用耗材:使用无核酸酶的枪头、EP管等,建议使用带滤芯枪头。
规范操作:加样后立即盖紧管盖,避免试剂外溅。
2、保证质量
样本处理:样本采集后应立即冷藏(2-8℃),长期保存需置于-70℃以下,避免反复冻融。
试剂保存:严格按照说明书要求的温度(通常是-20℃或2-8℃)保存试剂,避免反复冻融。
对照设置:每次实验必须设置阳性对照、阴性对照和空白对照,监控实验有效性。
3、注意安全
生物安全:阳性样本需按生物安全三级标准处理,实验人员需佩戴个人防护装备(PPE)。
废弃物处理:所有废弃物(包括耗材、样本)需经121℃高压灭菌30分钟后方可丢弃
关键字: 流感嗜血杆菌;检测试剂盒;
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