产品介绍:

关于巴西出血热病毒(Sabia virus)核酸检测试剂盒,需要特别说明的是,与登革热、汉坦病毒等常见出血热病毒不同,Sabia 病毒属于生物安全四级(BSL-4)病原体,且病例极为罕见。因此,市面上不存在商业化销售的现成商品化试剂盒(如普通PCR试剂盒)。
产品名称 | 巴西出血热病毒核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3213 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
1. 检测方法与原理(科研/特殊实验室用)

由于该病在临床上极其罕见(目前全球仅报告数例),其核酸检测主要局限于高级别生物安全实验室(BSL-4)或特定的病毒参考实验室进行。
检测技术: 主要基于实时荧光定量 RT-PCR (Real-time RT-PCR) 技术。
靶标区域: 针对 Sabia 病毒基因组的保守区域设计引物和探针。Sabia 病毒基因组为分节段的单股负链 RNA,通常靶向 L 基因(长片段) 或 S 基因(短片段) 的特定保守序列。
操作流程:

样本处理: 在 BSL-4 实验室中处理患者血液或体液样本,提取病毒 RNA。
逆转录: 将提取的 RNA 反转录为 cDNA。
PCR 扩增: 使用特异性引物进行扩增,通过荧光信号判断是否存在病毒核酸。
2. 产品特点与现状
定制化/内部使用: 该检测通常不是购买现成的“盒装”试剂,而是由实验室根据已发表的病毒基因序列自行设计引物探针,配合通用的 RT-PCR 试剂(如 TaqMan Fast Virus One-Step Master Mix)进行配制。
高生物安全要求: 由于 Sabia 病毒可通过气溶胶传播且致死率高,所有检测操作必须在生物安全四级实验室中进行,普通医院或 CDC 实验室不具备检测条件。
3. 主要用途

确诊罕见病例: 用于确诊有巴西疫区旅居史、啮齿类动物接触史或实验室暴露史的疑似患者。
病毒学研究: 用于病毒的基因分型、遗传进化分析等基础研究。
4. 储存与使用注意事项
生物安全风险: 这是最关键的一点。任何涉及 Sabia 病毒核酸提取和扩增的操作,都必须严格遵守 BSL-4 防护标准,穿戴正压防护服,使用独立的负压实验室和专用仪器。
样本稳定性: 病毒 RNA 极易降解,样本需在低温(-80℃)下保存和运输。
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操作步骤:

整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑,核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本:鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解:将拭子浸入裂解液,充分混匀后室温静置10分钟。
提取:采用磁珠法或离心柱法提取总RNA,严格按照试剂盒说明书操作。
保存:洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备:在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积,通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系:例如,使用20μL体系的试剂盒,可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL(具体体积请以实际说明书为准)。
分装:将配好的反应体系分装至PCR反应管中(如20μL/管)。
加样:在样本处理区,分别向反应管中加入5μL的模板RNA(样本、阳性质控、阴性质控)。盖紧管盖,短暂离心,避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序:将反应管放入荧光定量PCR仪,运行预设程序。典型程序包括:
逆转录:50℃,15分钟(将RNA逆转录为cDNA)。
预变性:95℃,10分钟(激活Hot-Start Taq酶)。
扩增循环:通常为40个循环,每个循环包括变性(95℃,15秒) 和 退火/延伸(60℃,45秒),仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测:仪器实时监测荧光信号变化,生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值:仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数(Ct值)。
结果判定:
阳性:样本Ct值 ≤ 37(具体阈值请以试剂盒说明书为准),且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性:样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效:阳性对照无Ct值或Ct值 > 35,或阴性对照有Ct值,需重新检测。
关键字: 巴西出血热病毒;核酸检测试剂盒;
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