产品介绍：
耶氏肺孢子菌是一种机会性真菌病原体，主要引起肺孢子菌肺炎（PCP）。该病在HIV感染者、器官移植受者、恶性肿瘤化疗患者及长期使用免疫抑制剂的自身免疫性疾病患者等免疫功能低下人群中具有较高的发病率和致死率。传统的染色镜检法灵敏度较低，而核酸检测技术（PCR）具有极高的灵敏度和特异性，已成为PCP诊断的重要手段。
产品名称 | 耶氏肺孢子菌核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3277 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
1. 检测原理与技术
该试剂盒主要基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，通常采用TaqMan探针法。
核心机制：
DNA提取：从痰液、诱导痰、支气管肺泡灌洗液（BALF）或肺组织等样本中提取病原体的基因组DNA。
荧光PCR扩增：针对耶氏肺孢子菌基因组中高度保守的区域（如线粒体大亚基rRNA基因、核糖体RNA基因或胸苷酸合成酶基因）设计特异性引物和探针。
内标质控：通常包含内源性内标（如人源基因）或外源性内标，用于监控样本采集、核酸提取和扩增过程，防止假阴性。
优势：相比传统镜检，PCR技术能显著提高检出率，尤其适用于早期诊断和低负荷感染的检测。
2. 试剂盒特点与性能
这类试剂盒专为侵袭性真菌感染的早期诊断设计，具有以下显著特点：
性能维度 描述
特异性 极高。引物和探针专门针对耶氏肺孢子菌设计，通常不会与新型隐球菌、曲霉菌、白色念珠菌等其他真菌发生交叉反应。
灵敏度 极高。最低检测限通常可达 10²～10³ copies/mL，能有效检测出微量病原体。
临床价值 早期诊断。有助于在影像学改变不明显或症状不典型时进行早期干预，降低死亡率。
检测速度 快速。整个检测流程（含核酸提取）通常在 2-3 小时 内完成。
3. 适用样本与应用场景
适用样本：
支气管肺泡灌洗液（BALF）：确诊PCP的首选样本，检出率最高。
痰液/诱导痰：适用于非侵入性筛查，但灵敏度略低于BALF。
肺组织：经皮肺穿刺或外科手术获取的组织样本。
应用场景：
高危人群筛查：对HIV、移植受者、肿瘤化疗患者进行定期监测。
辅助诊断：结合临床症状（如干咳、发热、呼吸困难）和影像学（磨玻璃影）进行综合诊断。
疗效评估：通过定量检测DNA载量变化，辅助评估抗PCP治疗的疗效。
4. 操作注意事项
样本采集：BALF样本应在支气管镜检查时无菌采集；痰液样本应尽量避免唾液污染。
防污染：PCR检测极其灵敏，必须严格分区操作，防止扩增产物污染导致假阳性。
结果解读：核酸检测阳性提示存在耶氏肺孢子菌感染或定植。在免疫功能极度低下的患者中，定植可能进展为感染，需结合临床症状、CD4+ T细胞计数（针对HIV患者）和影像学综合判断。单纯定植不一定需要治疗，但需密切观察。
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操作步骤：
整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑，核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。
提取：采用磁珠法或离心柱法提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。
保存：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备：在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系：例如，使用20μL体系的试剂盒，可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL（具体体积请以实际说明书为准）。
分装：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如20μL/管）。
加样：在样本处理区，分别向反应管中加入5μL的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。盖紧管盖，短暂离心，避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：
逆转录：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。
预变性：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。
扩增循环：通常为40个循环，每个循环包括变性（95℃，15秒） 和 退火/延伸（60℃，45秒），仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。
结果判定：
阳性：样本Ct值 ≤ 37（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性：样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效：阳性对照无Ct值或Ct值 > 35，或阴性对照有Ct值，需重新检测。
关键字： 耶氏肺孢子菌;检测试剂盒;
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