回归热疏螺旋体（回归热包柔螺旋体）染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 回归热疏螺旋体（回归热包柔螺旋体）染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Borrelia recurrentis Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4538 |
性能特点
即开即用：用户仅需提供DNA模板，操作便捷。
高特异性：引物基于回归热疏螺旋体保守区设计，避免交叉反应。
高灵敏度：荧光定量PCR技术检测限低，优于常规PCR。
闭管操作：一管式设计减少污染风险。
双重功能：支持定性与定量检测，定量线性范围达5个数量级。
试剂盒组成
| 成分 | 规格/包装 | 备注 |
| 2×qPCR Magic Mix | 500 μL（棕色管） | 含荧光染料与聚合酶 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL（黄盖） | 用于标准品稀释 |
| qPCR引物混合液 | 100 μL（白盖） | 特异性引物与探针 |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） | 非活体DNA片段 |
| 说明书 | 1份 | 含操作流程与参数设置 |
操作步骤
1. 阳性对照稀释（示例：10^2~10^7拷贝/μL）
在独立区域进行，避免污染。
取6管，分别加入45 μL稀释液，梯度稀释阳性对照（5 μL原液+45 μL稀释液，依次10倍稀释）。
2. PCR反应体系（20 μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| 2×qPCR Magic Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 超纯水 | 6 |
3. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
| 退火 | 50-65℃ | 20 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb| |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
注：退火温度需根据引物Tm值调整（建议低于理论值2-5℃）。
常见问题与解决
无扩增条带：检查试剂活性（避免反复冻融）、优化退火温度或重新设计引物。
弱扩增信号：确保模板质量，避免稀释液过量。
假阳性：操作时分区进行，避免交叉污染。
注意事项
试剂需避光保存，避免反复冻融。
阳性对照为DNA片段，不可用于活体实验。
具体参数可能因仪器型号调整，建议预实验优化条件。
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