皱褶青霉染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 皱褶青霉染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Penicillium rugulosum Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4564 |
检验原理
本试剂盒基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，通过检测双链DNA结合染料的荧光信号实现靶标基因的定量分析。特点包括：
高灵敏度：检测下限达100拷贝/反应。
高特异性：引物针对皱褶青霉（Penicillium rugulosum）高度保守区设计，避免与其他生物DNA交叉反应。
多功能性：支持定性和定量检测，定量线性范围覆盖至少5个数量级。
即用型设计：用户仅需提供样品DNA模板，试剂盒包含预混MasterMix，简化操作流程。
试剂组成
2×SYBR qPCR MasterMix：0.5 mL ×1管（含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green染料）。
荧光PCR专用模板稀释液：1 mL ×1管（用于标准品梯度稀释）。
超纯水：1 mL ×1管（阴性对照或稀释用途）。
阳性对照（部分版本提供）：含靶标基因片段，用于验证实验有效性。
操作流程
模板制备：提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。
反应体系配制：按20μL体系混合模板、引物、MasterMix及超纯水。
PCR程序设置：
预变性：95℃ 5分钟（复杂样本需延长至10分钟）。
循环阶段：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环），荧光信号采集于延伸步骤完成时。
数据分析：通过标准曲线法或Ct值比较实现定量分析。
注意事项
避免污染：实验分区操作，使用无核酸酶耗材。
引物验证：若需自行设计引物，需通过BLAST验证特异性。
保存与运输：反复冻融≤3次，长期储存建议分装。
常见问题解决
无扩增信号：检查模板完整性或稀释阳性对照验证试剂活性。
非特异性扩增：优化退火温度或重新设计引物。
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