立克次氏体通用染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术开发，适用于立克次氏体属（Rickettsia spp.）核酸的定性与定量检测。通过优化引物设计及反应体系，可实现高灵敏度和特异性检测，适用于科研用途。

产品特点

即开即用：用户仅需提供待测DNA模板。

高灵敏度：检测限可达1000拷贝/反应。

特异性强：引物针对立克次氏体高度保守序列设计，避免交叉反应。

多功能性：支持定性与定量检测，定量线性范围覆盖至少5个数量级。

质量控制：含阳性对照，用于区分假阴性结果。

规格：50次20μL体系反应（含预混MasterMix、模板稀释液等）。

检测原理

荧光染料特性：

游离状态下吸收峰471 nm，结合DNA后吸收峰500 nm，发射峰530 nm。

信号采集建议在复性或延伸阶段进行。

数据分析：

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算待测样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且需典型扩增曲线。

待测样本Ct≤35判为阳性，≥40判为阴性；35<Ct<40需复测，复测Ct<40判为阳性。

操作步骤

DNA提取：使用兼容的核酸提取试剂盒制备样本DNA。

标准曲线稀释（定量检测需独立操作）：

将阳性对照梯度稀释至6个浓度（建议10倍稀释系列）。

PCR反应配制：

按20μL体系加入预混MasterMix、引物、模板DNA及无核酸酶水。

上机检测：

按仪器推荐程序设置扩增条件（通常为：95℃预变性3分钟；95℃ 15秒→60℃ 1分钟，40循环）。

结果分析：

定量检测通过标准曲线计算浓度；定性检测依据Ct值判读。

注意事项

避免试剂污染，分区操作（样本制备区、PCR反应区）。

复测样本需使用同一批试剂以减少误差。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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