检验原理
本试剂盒基于SYBR Green荧光染料法，通过实时荧光定量PCR技术检测奥斯特奥斯特线虫特异性基因保守区域。引物经优化设计，可高灵敏度、高特异性地扩增目标核酸，并通过荧光信号实时监测实现定性与定量分析。
产品名称 | 奥斯特奥斯特线虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Ostertagia ostertagi Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4424 |
试剂组成
PCR MagicMix 3.0：1 mL（含预混酶、dNTPs及缓冲液）
超纯水：1 mL（用于稀释或对照）
引物混合液：100 μL（特异性引物对）
阳性对照：50 μL（1×10^8拷贝/μL，黄盖）
阴性对照：50 μL（无核酸酶水）
说明书：1份
储存条件及有效期
储存：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（建议分装使用）。
有效期：12个月（自生产日期起）。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 系列（如7500、StepOnePlus）
Bio-Rad（CFX系列）
Roche LightCycler
Eppendorf Mastercycler
自备耗材与设备
无核酸酶离心管（0.2mL PCR管、1.5mL EP管）
滤芯吸头（10μL、200μL、1000μL）
离心机、振荡器、移液器
样本DNA提取试剂（可选配套核酸释放剂）
样品要求
样本类型：胃液分泌物、组织样本或培养物（需符合《临床微生物样本采集规范》）。
保存与运输：短期-20℃保存，长期-70℃；运输需使用2~8℃冰袋，避免反复冻融。
使用方法
样本处理：
提取样本DNA（推荐配套核酸提取试剂）。
阴性/阳性对照无需处理，直接使用。
反应体系配制（20μL/反应）：
模板DNA：2-5 μL
PCR MagicMix：10 μL
引物混合液：1 μL
超纯水：补足至20 μL
PCR程序：
预变性：95℃ 5分钟
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）
数据分析：
通过阈值循环数（Ct值）判定结果，标准曲线法计算拷贝数。
注意事项
严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增检测）。
使用前充分混匀试剂并短暂离心。
避免气泡干扰，确保反应管密封。
实验后需用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台。
废弃物按生物危害物处理。
质量控制
阳性对照：应出现典型扩增曲线，Ct值≤30。
阴性对照：无扩增信号（Ct值≥40或无信号）。
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