检验原理
本试剂盒基于SYBR Green I染料法实时荧光定量PCR技术，针对嗜冷黄杆菌基因保守区域设计特异性引物，通过扩增靶标DNA并监测荧光信号强度实现定性/定量检测。SYBR Green染料可特异性结合双链DNA，扩增过程中荧光信号强度与产物量成正比，经仪器实时分析后输出Ct值。
产品名称
嗜冷黄杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称
Flavobacterium psychrophilum Dye-based qPCR Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR4461
试剂组成
| 组分 | 规格及包装 |
| 嗜冷黄杆菌扩增液 | 50μL×1管 |
| 嗜冷黄杆菌反应液 | 950μL×1管 |
| 阳性质控品（含靶标） | 50μL×1管 |
| 阴性质控品（无靶标） | 50μL×1管 |
| 说明书 | 1份 |
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 7500/StepOnePlus
Bio-Rad CFX系列
Roche LightCycler 480
Eppendorf Mastercycler ep realplex
检测流程
样本处理：提取待测样本基因组DNA（建议纯度A260/A280为1.8-2.0）。
反应体系配制：
扩增液：1μL
反应液：19μL
模板DNA：2-5μL（总量≤20μL）
PCR程序：
预变性：95℃ 5分钟
扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环）
熔解曲线分析：60℃至95℃（0.5℃/秒）
结果判读：
定性检测：
阳性：Ct值≤35且熔解曲线单一峰；
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；
可疑（35<Ct<40）：需复测确认。
定量检测：以阳性质控品标准曲线计算样本拷贝数。
性能参数
特异性：与嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌等无交叉反应。
灵敏度：最低检测限12拷贝/μL（参考同类试剂盒数据）。
重复性：批内/批间变异系数（CV）<5%。
注意事项
不同批号试剂禁止混用。
避免试剂反复冻融，建议分装保存。
实验需设置阴/阳性对照，以排除污染或假阴性。
熔解曲线出现非特异峰时需优化引物浓度或退火温度。
应用范围
水产病原体（如虹鳟溃烂病）的致病性研究。
嗜冷黄杆菌耐药性分析及流行病学调查。
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