流感嗜血杆菌B型染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 流感嗜血杆菌B型染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Haemophilus influenzae type B Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4601 |
产品用途
专用于科研实验中流感嗜血杆菌B型核酸的定性或定量检测，不可用于临床诊断。
检测原理
基于染料法荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增靶序列，结合荧光信号实时监测扩增产物。
灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的病毒核酸。
特异性：针对流感嗜血杆菌B型保守序列设计引物，与其他常见病原体无交叉反应。
规格与成分
规格：50次/盒（20 μL反应体系）。
主要成分：
试剂一：2×qPCR MagicMix（预混酶、dNTPs、缓冲液等），500 μL（棕色管）。
试剂二：荧光PCR专用模板稀释液，1 mL（黄盖）。
试剂三：流感嗜血杆菌B型特异性引物混合液，100 μL（白盖）。
保存与运输
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
有效期：6个月至1年（不同略有差异）。
运输：低温（冰袋或干冰）运输。
操作步骤
样本处理：提取待测样本RNA/DNA，使用试剂二稀释模板。
反应体系配制（以20 μL为例）：
2×qPCR MagicMix：10 μL
引物混合液：2 μL
模板DNA：2 μL
无核酸酶水：补足至20 μL
PCR程序设置：
预变性：94℃ 5 min（1循环）
扩增循环（30-40次）：
变性：94℃ 10 sec
退火：50-65℃（依引物Tm值优化） 20 sec
延伸：72℃ 30 sec/kb（片段≤1 kb时建议30 sec）
终延伸：72℃ 5 min（1循环）
注意事项
退火温度优化：建议低于引物理论Tm值2-5℃，通过梯度PCR确定最佳条件。
污染控制：
分装试剂，避免反复冻融。
实验分区操作（样本处理区、PCR扩增区、产物分析区）。
异常结果处理：
无扩增信号：检查试剂活性、引物特异性或重新优化反应条件。
非特异性条带：调整退火温度或更换引物。
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