脑心肌炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品组成

反应液：100μL×1管（含预混引物、探针及荧光染料）

阳性质控品：900μL×1管（已知浓度脑心肌炎病毒RNA）

阴性质控品：50μL×1管（无RNA酶水）

说明书：1份

自备材料

无DNA/RNA酶的1.5mL离心管、0.2mL PCR反应管

滤芯吸头（10μL、200μL、1000μL）

离心机、振荡混合器、移液器

储存条件及有效期

储存：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（建议冻融次数＜7次）。

有效期：12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI系列（如7500、QuantStudio）

MX3000P/3005P

LightCycler（Roche）

Bio-Rad（CFX系列）

Eppendorf（Mastercycler ep realplex）

样本要求

样本类型：全血、血清、血浆、口腔拭子、病毒培养物等（需符合《临床微生物样本采集规范》）。

保存条件：

短期：-20℃±5℃（≤7天）

长期：-70℃以下

操作步骤

反应体系配制（20μL体系）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 反应液 | 10 |

| 待测样本RNA/质控品 | 5 |

| 超纯水 | 5 |

PCR程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

扩增循环（40个循环）：

94℃ 15秒

60℃ 1分钟（采集FAM通道荧光信号）

结果判读

定量检测：以标准品Ct值绘制标准曲线（log浓度vs. Ct值），计算样本RNA浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，且扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct≥40，或无扩增曲线。

灰区（35＜Ct＜40）：需复测；复测Ct＜40且曲线起峰判为阳性。

注意事项

不同批号试剂不可混用。

避免样本交叉污染，操作时需分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。

阴性质控品Ct值应≥40，阳性质控品Ct值应≤30。

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