甲型流感病毒H10N7亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

检验原理

靶标基因：甲型流感病毒（Influenza A Virus）保守的M基因片段及H10N7亚型特异的HA/NA基因片段。

方法学：

采用TaqMan探针法（染料法），配合特异性引物与荧光探针。

通过一步法RT-PCR扩增，实时监测荧光信号，实现病毒RNA的定性及定量检测。

适用范围

样本类型：

禽类咽喉/泄殖腔拭子、组织匀浆液、鸡胚尿囊液、环境样本（需经核酸提取）

应用场景：

禽类H10N7亚型流感疫情监测、活禽市场筛查、实验室病原诊断。

试剂盒组分

| 组分名称 | 规格（96测试） |

| RT-PCR反应液 | 1.2 mL × 2管 |

| H10N7特异性引物探针混合液 | 150 μL × 1管 |

| RT-PCR酶混合液 | 100 μL × 1管 |

| 阳性对照（H10N7 RNA） | 50 μL × 1管 |

| 阴性对照（无核酸水） | 1 mL × 1管 |

| RNase-Free纯水 | 1 mL × 1管 |

检测灵敏度与特异性

灵敏度：≤ 100 copies/μL（95%检出率）

特异性：

可特异性检出H10N7亚型，不与H1-H9、H11-H16亚型及常见禽病原体（如NDV、IBV等）交叉反应。

操作步骤

1. 样本前处理

样本需经病毒RNA提取试剂盒（如柱式法）纯化，建议使用配套核酸提取系统。

2. PCR反应体系配制

| 组分 | 体积（μL/反应） |

| RT-PCR反应液 | 10.0 |

| 引物探针混合液 | 2.0 |

| RT-PCR酶混合液 | 0.5 |

| 模板RNA | 2.0 |

| RNase-Free水 | 补至20 μL |

3. 扩增程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 逆转录 | 50℃ | 15 min | 1 | 否 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 是 |

| | 60℃ | 45 sec | | |

荧光通道选择：

FAM通道：H10N7靶标基因

VIC/HEX通道：内标（可选配）

结果判读标准

| 结果类型 | CT值范围 | 曲线特征 |

| 阳性 | CT ≤ 38.0 | S型扩增曲线，阈值清晰 |

| 可疑 | 38.0 < CT < 40.0 | 重复检测确认 |

| 阴性 | CT ≥ 40.0 或未检出 | 无扩增曲线 |

有效性要求：

阳性对照：CT ≤ 35.0

阴性对照：无扩增（CT = Undetermined）

注意事项

生物安全：

操作需在BSL-2实验室进行，穿戴防护装备，废弃物需121℃高压灭菌处理。

防污染：

分装试剂，严格区分核酸提取区、PCR配制区、扩增区。

质量控制：

每批次检测需包含阴/阳性对照。

局限性：

阳性结果需结合流行病学及临床症状综合判断，必要时进行病毒分离确证。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存（避免反复冻融，有效期12个月）。

运输条件：干冰或冰袋（-15℃以下）。

声明：

本说明书为模拟文件，实际产品参数以具体试剂盒为准。

本检测仅用于科研及兽医诊断，不可用于人类临床诊断。

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