运用双抗体夹心法。包被抗大鼠HCN4抗体于酶标板，样本和标准品中的HCN4与包被抗体结合，然后加入生物素化的抗大鼠HCN4抗体，形成免疫复合物，再加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，与生物素结合，加入TMB底物显色，颜色深浅与HCN4含量成正比，通过酶标仪读数和标准曲线计算样本中HCN4的浓度。
产品名称 | 大鼠环化核苷酸调控阳离子通道蛋白亚型4(HCN4)elisa试剂盒 | 灵敏度 | 0.078125ng/ml |
英文名称 | RatHCN4 elisa kit | 货号 | PR9283 |
检测范围 | 0.15625ng/ml-10ng/ml | 品牌 | 派瑞曼 |
夹心法数据：
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
| 校准品浓度(ng/mL) | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.16 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.691 | 1.552 | 0.828 | 0.488 | 0.355 | 0.173 | 0.097 | 0.030 |
| 校正OD值 | 2.660 | 1.521 | 0.798 | 0.458 | 0.325 | 0.142 | 0.067 | 0.000 |
夹心法标曲：
核心参数：
原理：双抗体夹心法 ELISA
种属：大鼠特异性
样本：血清、血浆、细胞上清、组织匀浆
时长：3-4h
保存：2-8℃避光冷藏
特异性：特异性结合大鼠 HCN4
板内 CV：＜8%
原理：双抗体夹心法 ELISA
种属：大鼠特异性
样本：血清、血浆、细胞上清、组织匀浆
时长：3-4h
保存：2-8℃避光冷藏
特异性：特异性结合大鼠 HCN4
板内 CV：＜8%
样本处理与保存方法:
不同样本的处理方式有所差异，处理后需确保样本清澈无沉淀，避免溶血或高血脂样本影响结果：
血清样本
全血标本室温放置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清液检测
短期保存（1周内）可置于4℃，长期保存需分装后-20℃/-80℃冻存，避免反复冻融
血浆样本
选择EDTA或肝素作为抗凝剂，采血后30分钟内于2-8℃环境1000×g离心15分钟，取上清液
保存条件同血清样本
组织匀浆样本
用预冷的PBS（0.01M，pH=7.4）冲洗组织，去除残留血液，称重后剪碎
按1:9的重量体积比加入PBS（如1g组织加9mL PBS，可添加蛋白酶抑制剂），冰上充分研磨或超声破碎
5000×g离心5-10分钟，取上清液检测；未使用的样本分装后冻存
细胞培养上清样本
1000×g离心20分钟，去除细胞碎片及杂质，取上清液检测
若检测细胞内成分，需用PBS稀释细胞悬液至浓度约100万/mL，反复冻融裂解细胞后离心取上清
尿液样本
无菌管收集尿液，2000-3000转/分离心20分钟，取上清液检测；若有沉淀需再次离心
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关键字： 大鼠环化核苷酸调控阳离子通道蛋白亚型4;HCN4;elisa试剂盒;
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