葡萄糖氧化酶（GOD）活性检测试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H2O2，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。
测定原理：
GOD催化葡萄糖氧化产生H₂O₂，过氧化物酶在有氧存在时催化H₂O₂分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
试自备仪器和用品：
酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、蒸馏水。
样品处理：
1. 组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g，4°C离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌/细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每500万细菌/细胞加入1mL提取液，超声波破碎（200W，超声3s，间隔10s，重复30次）。8000g，4°C离心10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）：直接检测。
活性计算：
1. 动物组织GOD活力的计算
（1）按蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD（U/mg prot）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(cpr×V样本)÷T=1.111×ΔA÷Cpr
（2）按样本质量计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD（U/g 质量）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(W÷V提取×V样本)÷T=1.111×ΔA÷W
（3）血清（浆）GOD活力的计算
单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V反总÷V样本÷T=1.111×ΔA
（4）细菌/细胞GOD活力的计算
单位的定义：每1万细菌/细胞在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD（U/104 cell）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(500÷V提取×V样本)÷T=2.222×10-3×ΔA
V反总：反应总体积，0.2mL；V样本：加入样本体积，0.02mL；V提取，加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌/细胞数量，500万；d：光径，0.6cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5 mL/μmol/cm；T：反应时间，2h。
注意事项：
1. 不同匀浆组织中GOD活力不一样，做正式试验之前请做1-2次预实验，若A2-A1>0.8，则说明组织活力太高，建议用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液，使A2-A1＜0.8，以提高检测灵敏度。实验过程中若出现A1>A2现象请将样本用提取液稀释成适当浓度。
2. 本试剂盒默认的反应时间为2小时，该参数主要针对葡萄糖氧化酶（GOD）活性较低的样品（常见情况）。若样品中GOD活性较高，反应可能在数分钟内完成，并伴随显著的颜色变化。此时，2小时的反应时间将导致过度反应，若出现该情况建议采取以下措施：对样品进行适当稀释；或根据实际情况缩短反应时间，并相应调整计算公式中的时间参数。
3. 为了减少误差，建议两个人同时做此实验，一个人进行反应操作，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
关键字： 葡萄糖氧化酶（GOD）;葡萄糖氧化酶（GOD）检测试剂盒;邻联茴香胺法;
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