单纯疱疹病毒探针法qPCR试剂盒

单纯疱疹病毒探针法qPCR试剂盒(不含内参) 

产品及特点     
单纯疱疹病毒（Herpes Simplex Virus，HSV）是圆形病毒，具有双链线性的DNA，全长约125—240kb。根据单纯疱疹病毒抗原性质的不同分为两个亚型：即HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ。HSV-Ⅰ主要侵犯面、脑及腰以上部位，HSV-Ⅱ主要侵犯生殖器及腰以下部位。正常人可作为病毒携带者。人是单纯疱疹病毒惟一的自然宿主，70%～90%的成人皆曾感染过HSV-Ⅰ。病毒经过口腔、呼吸道、生殖器以及皮肤破损处侵入体内，潜居于人体正常黏膜、血液、唾液、神经组织及多数器官内。单纯疱疹病毒的流行给人类的生活带来很大的困扰，因此快速检测单纯疱疹病毒具有重要意义。本产品是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测单纯疱疹病毒的试剂盒，它有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2. 引物和探针经过优化，分析灵敏度高，可以达到100拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据管圆线虫DNA高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6. 本产品足够50次20 μL体系的探针法qPCR反应。
7. 本产品只能用于科研。
规格及成分

稀释标准曲线样品

（以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。

2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，好用带芯枪头，

下同）。

3. 在6号管中加入5μL1×10E7拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震

荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在5号管中加入5μL1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所

得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在4号管中加入5μL1×10E5拷贝/μL的阳性对照(上步所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样品DNA的制备

7. 如果有N个样品，好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。

8. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
数据处理

1. 如果扩增阳性对照或制备阳性对照结果为阴性，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系，购买新的引物和探针。

2. 如果阴性对照和阳性对照正常，则实验有效，可以进入后续分析。

3. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。

4. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无Ct或Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct或Ct大于或等于40，则为阴性。如果Ct小于40则为阳性。

自备试剂
样品DNA，超纯水，核酸纯化试剂盒。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期2年。