磷酸化细胞信号转导分子Smad-1/5抗体
原理特点
该抗体可特异性识别Smad1、Smad5蛋白的保守磷酸化修饰位点，靶向结合活化态Smad1/5蛋白。Smad1/5是BMP信号通路核心下游分子，磷酸化修饰是其活化、核转位、调控骨分化、细胞增殖与胚胎发育的关键，该抗体可同步检测两种蛋白的磷酸化活化水平，评估BMP通路活性；同时可封闭磷酸化功能位点，阻断Smad1/5介导的下游基因转录，干扰骨代谢、细胞分化进程，适用于骨发育异常、组织修复、肿瘤分化机制研究。
英文名称:phospho-Smad1/5 (Ser463 + Ser465) Rabbit pAb
中文名称:磷酸化细胞信号转导分子Smad-1/5抗体
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文别名:Smad1(phospho S463/465); Smad1(phospho Ser463/465); p-Smad1(Ser463/465); Mothers against decapentaplegic homolog 1; BSP 1; BSP1; BSP-1; Dwarfin A; DwfA; hSMAD 1; hSMAD1; JV 41; JV4 1; JV4-1; JV41; MAD mothers against decapentaplegic homolog 1; Mad related protein 1; MADH 1; MADH1; Madr 1; MADR1; Mothers against decapentaplegic homolog 1; Mothers against DPP homolog 1; Sma and Mad related protein 1; SMAD 1; SMAD-1; SMAD family member 1; SMAD mothers against DPP homolog 1 Drosophila; Spinal muscular atrophy distal with upper limb predominance; TGF beta signaling protein 1; Transforming growth factor beta signaling protein 1; SMAD1_HUMAN; MAD homolog 1; Mothers against DPP homolog 1; Mad-related protein 1; SMAD family member 1; Smad1; Transforming growth factor-beta-signaling protein 1.
交叉反应:Human,Mouse,Rat,Pig
抗体来源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human Smad1/5 around the phosphorylation site of Ser463/465
亚型:IgG
性状:Liquid
纯化方法:affinity purified by Protein A
克隆类型:Polyclonal
理论分子量：52 kDa
浓度：1mg/ml
储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶点背景
靶点背景：Smad1/5 是 BMP 通路受体调控型分子，BMP 受体介导 C 端磷酸化后入核，调控成骨、分化、胚胎发育。
抗体原理：Smad1/5 同源磷酸化位点肽，同步识别两种活化蛋白，不结合 Smad2/3。
产品特点：成骨细胞、软骨组织标配，用于骨质疏松、骨修复、干细胞成骨分化实验。
核心实验操作方法
1. Western Blot（WB）
抗体孵育
一抗孵育：用5%脱脂牛奶或BSA稀释抗体至推荐浓度（如1:1000），4℃摇床缓慢孵育过夜；或室温孵育1-2小时，孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中。
洗涤：用TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟，洗去未结合的一抗；加入HRP标记二抗（1:5000-1:10000稀释），室温孵育1小时。
显影：再次洗涤后，加入ECL发光液孵育1-2分钟，用化学发光成像仪采集图像，根据信号强度调整曝光时间。
2. 免疫组化（IHC）
抗体孵育
一抗孵育：滴加稀释后的一抗（如1:200）于组织切片上，置于湿盒中4℃孵育过夜；次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入生物素标记二抗（1:200）室温孵育30分钟，PBS冲洗后加入ABC复合物（1:100）室温孵育30分钟。
显色封片：DAB显色剂显色3-10分钟（显微镜下观察控制时间），苏木素复染1分钟，梯度乙醇脱水后中性树胶封片。
3. 免疫荧光（IF）
抗体孵育
一抗孵育：用5% BSA稀释抗体至工作浓度（如1:100），滴加在细胞爬片上，4℃避光孵育过夜；室温复温后PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入荧光标记二抗（如FITC标记抗兔IgG，1:200），室温避光孵育30-60分钟；PBS冲洗后用抗淬灭封片液封片。
观察：荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察，激发波长根据二抗标记物选择（如FITC为488nm）。
4. ELISA实验
包被与孵育
包被：用包被缓冲液（pH9.6碳酸盐缓冲液）稀释抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃过夜孵育。
封闭与一抗孵育：弃去包被液，PBST洗涤3次，加入5% BSA封闭液200μl/孔，37℃孵育1小时；加入稀释后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。
检测：洗涤后加入酶标二抗（1:5000），37℃孵育1小时；TMB底物溶液显色10-30分钟，2M硫酸终止反应后，酶标仪450nm波长读取OD值。
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