产气克雷伯氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒（含内参）使用方法
一、DNA 提取(样本制备区)
用自选方法提取纯化样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
二、稀释标准曲线样品(样本制备区)
（由于阳性对照浓度高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，避免污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光模板稀释液，（最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1.00E+08 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1.00E+07 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1.00E+07 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1.00E+06 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1.00E+06 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1.00E+05 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。若无需制作标准曲线，只做定性检测，将阳性对照稀释到 1.00E+05 拷贝/μL 即可。
产气克雷伯氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒（含内参）结果分析
1. 质量控制，以下条件有一条不满足时，结果视为无效：
(a)空白对照：无 FAM/HEX 荧光信号检出；
(b)阴性对照：无 FAM 荧光信号检出，有 HEX 荧光信号检出，且 HEX 通道 Ct 值≤30.0；
(c)阳性对照(1.00E+05 拷贝/μL)：有 FAM/HEX 荧光信号检出，且 Ct 值均≤30.0。
2. 如果制作标准曲线，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，推算出其浓度。
3. 如果未制作标准曲线，按照如下标准判定结果：
样本检测结果：FAM/HEX 通道的均 Ct 值≤38，有明显指数增长，结果为阳性；FAM 通道 Ct 值≥40 或无 Ct 值，且 HEX 通道 Ct 值≤38，结果为阴性；FAM 通道 Ct 值在38-40 范围，且 HEX 通道 Ct 值≤38，应对样本进行复检，如重复实验结果 Ct 值仍在 38-40 范围，有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性；HEX 通道 Ct 值＞38.0 或无扩增曲线，则需重新取样检测。
产气克雷伯氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒（含内参）