大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔内包被纯化的大鼠前列腺酸性磷酸酶（PAP）特异性捕获抗体。加入待测样本与标准品后，样本中的PAP抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗板后加入酶标记检测抗体，形成特异性免疫夹心复合物。充分洗涤去除未结合物质后，底物在酶的作用下显色，吸光度值与样本中PAP含量呈正相关，通过标准曲线即可定量检测大鼠样本中前列腺酸性磷酸酶的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限值0.3U/L，可精准检测大鼠前列腺组织、血清中PAP酶活性含量。

检测范围：0.8U/L - 60U/L，适配大鼠前列腺损伤、前列腺病变模型检测。

反应时间：全流程反应120分钟，酶促反应充分，检测结果精准。

保存条件：试剂盒2 - 8℃冷藏保存，酶底物液需单独避光存放，防止氧化失效。

有效期：原装密封有效期12个月，开封后试剂避光防潮保存。

特异性：特异性识别大鼠前列腺酸性磷酸酶，与其他磷酸酶无交叉反应，检测专一性强。

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%，重复性符合科研检测标准。

注意事项：样本需避免反复冻融，防止酶活性丧失；实验温度严格控制37℃，温度波动影响酶促反应；底物液现用现取，避免久置氧化。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

1. 试剂盒所有试剂室温复温 28min，稀释洗涤浓缩液；前列腺组织匀浆上清低温离心备用。

2. 酶标板分区标记，标准品孔加入梯度 PAP 标准品 50μL，样本孔加入待测上清 50μL，空白孔不加液。

3. 一步法加入酶结合工作液 100μL 至各检测孔，密封封板。

4. 37℃避光孵育 70min，稳定孵育无外力晃动。

5. 掀开封板，弃液洗板，每孔浸泡 28s，洗板 4 次，彻底拍干微孔。

6. 加入显色 A、B 液各 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 19min。

7. 加入终止液终止反应，450nm 测定 OD 值，拟合曲线算出 PAP 含量。