一、核心光学参数
TJ-647N的荧光在 625 - 660 nm 范围内被高效激发：
参数 | 数值 | 备注 |
最大吸收波长 (λabs) | 646 nm | 部分供应商数据为647 nm |
最大摩尔吸光系数 (εmax) | 1.5 × 10⁵ M⁻¹cm⁻¹ | 光吸收能力极强 |
最大发射波长 (λfl) | 664 nm | 部分供应商数据为663 nm |
荧光量子产率 (ηfl) | ~65% | 远高于标准版ATTO 647 (~30%) |
荧光寿命 (τfl) | 3.5 ns | 无 |
CF₂₆₀ / CF₂₈₀ | 0.04 / 0.03 | 用于校正标记蛋白在260/280nm的紫外吸收 |
净电荷 (偶联后) | +1 (阳离子) | 有助于提高水溶性 |
斯托克斯位移 | ~18 nm | 无 |
二、核心特点与优势
1、超高光稳定性：抗光漂白能力远超Cy5等传统染料，非常适合长时间的活细胞成像和超分辨率显微镜技术。
2、高荧光量子产率 (65%)：提供明亮且清晰的荧光信号。
3、优异的臭氧稳定性：对大气臭氧具有极高的稳定性，这使其在微阵列等应用中特别有价值。
4、pH不敏感性：在pH 2至11的广泛范围内，其吸收和荧光特性保持稳定。
5、低三线态形成率：这一特性使其非常适合单分子检测。
6、由两种异构体组成：这两种异构体的吸收和荧光特性几乎完全相同，确保批次间的一致性。
三、特别注意事项：荧光猝灭
TJ-647N是一个强电子受体，其荧光可能被鸟嘌呤（Guanine）、色氨酸（Tryptophan） 等电子供体有效猝灭。在标记富含这些氨基酸的蛋白质或核酸时，需评估潜在的荧光损失。
四、主要应用领域
1、超分辨率显微镜技术：非常适用于SIM、STED、PALM、dSTORM等超分辨成像。
2、单分子检测：低三线态率和高亮度使其成为单分子研究的利器。
3、流式细胞术 (FACS)。
4、荧光原位杂交 (FISH)。
5、活体成像：其红色至近红外荧光具有更低的背景干扰和更强的组织穿透能力。
6、微阵列：优异的臭氧稳定性使其非常适合微阵列等高通量检测平台。
7、多色荧光实验：可与绿色（如TJ-488）和远红色（如TJ-700）染料组合使用。
五、主要产品形式与应用
TJ-647N提供多种活性衍生物，可通过不同化学方式与目标分子偶联：
产品形式 | 主要应用 |
NHS酯 (NHS Ester) | 最常用。用于标记蛋白质、抗体、多肽等分子中的伯氨基(-NH₂) |
羧酸 (Carboxylic Acid) | 基础结构形式，用作参比标准品或合成前体 |
马来酰亚胺 (Maleimide) | 特异性地标记蛋白质或多肽中的巯基(-SH) |
碘乙酰胺 (Iodoacetamide) | 用于标记巯基(-SH) |
点击化学衍生物 | 包括DBCO、炔烃 (Alkyne)、叠氮化物 (Azide)等 |
磷脂 (Phospholipid) | 如DMPE和DOPE，用于研究生物膜结构 |
鬼笔环肽 (Phalloidin) | 特异性标记F-肌动蛋白，用于细胞骨架研究 |
生物素 (Biotin) | 提供生物素化标记 |
六、使用与储存建议
1、储存条件：作为固体，应在 -20°C 下干燥、避光保存。
2、溶解性：NHS酯等衍生物可溶于DMF、DMSO等有机溶剂。
3、标记反应：NHS酯与氨基的反应通常在pH 8.3的碳酸氢钠缓冲液或pH 7.5–8.5的HEPES缓冲液中进行。
4、注意事项：所有操作需严格避光。NHS酯衍生物对水敏感，应避免接触水分；含伯氨基的缓冲液（如Tris、甘氨酸）会抑制反应。
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