产品名称:禽副粘病毒通用PCR检测试剂盒
英文名称:Avian Paramyxovirus (APMV)RTPCR
货号:YS-P013848
分类:PCR检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:
靶向禽副粘病毒融合蛋白 F 基因高度保守区设计简并引物,适配新城疫等全部禽副粘病毒分支毒株,广谱筛查。
采用热启动聚合酶,常温下引物无非特异性结合,仅在扩增升温阶段启动酶活,大幅减少引物二聚体干扰。
扩增完成后结合熔解曲线分析,依据产物 Tm 值区分副粘病毒阳性样本与非特异性扩增产物,杜绝误判。
实验流程:
1. DNA提取(样本制备区)
使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA,建议浓度≥10 ng/μL,A260/A280比值1.8-2.0。
2. 标准曲线制备(独立操作区)
标记6管为梯度稀释点(如7-2),每管加45 μL DEPC水。
取5 μL阳性对照依次稀释,混匀后作为标准品(避免污染)。
3. PCR反应体系配制(试剂配制区)
按以下比例配制(示例):
| 组分 | 体积(μL) |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上机检测
程序设置:预变性95℃ 3 min;40循环(95℃ 10 s, 60℃ 30 s);熔解曲线分析。
数据分析:根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。
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注意事项:
1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域:试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区,各区实验服、移液器及耗材严禁混用,防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头,每步更换枪头;
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行,避免污染其他试剂;
加样后立即盖紧管盖,避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存,避免反复冻融,确保稳定性;
使用前于冰上解冻并轻柔混匀,瞬时离心后使用。
关键字: 禽副粘病毒通用;PCR检测试剂盒;
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