产品名称:枯草芽孢杆菌PCR检测试剂盒
英文名称:Bacillus subtilisPCR
货号:YS-P013882
分类:PCR检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:
引物靶向枯草芽孢杆菌特异性 spo0A 芽孢调控基因,特异性识别该菌种,不匹配其他芽孢杆菌基因组。
简单沸水裂解提取细菌 DNA,无需有机溶剂,适用于饲料、发酵菌粉快速检测。
内参 16S 通用菌基因同步扩增,验证样本细菌核酸提取是否成功。
实验流程:
样本制备:
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL,A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制(20 μL体系示例):
预混PCR Master Mix(含染料、dNTPs、Taq酶等)
特异性引物混合液
模板DNA(2~5 μL)
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序:
预变性:95℃ 5分钟;
循环阶段(40~45 cycles):95℃ 10秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号);
熔解曲线分析:60~95℃(可选,用于验证扩增特异性)。
结果判读:
阳性:Ct值≤35且熔解曲线峰单一;
阴性:Ct值≥40或无扩增曲线;
可疑:35<Ct值<40,建议复测或结合熔解曲线分析。
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注意事项:
所有耗材必须无核酸酶,吸头一次性使用,禁止重复吸取;
阳性模板拷贝浓度高,开盖操作轻柔,避免气溶胶扩散造成全域污染;
试剂融化后冰上放置不超过 2 h,用完立即放回 - 20℃;
废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃;
试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测,禁止人体临床检测;
移液器、操作台定期紫外消毒,长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。
关键字: 枯草芽孢杆菌;PCR检测试剂盒;
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