本试剂盒依托大肠杆菌属通用保守基因扩增技术，可全面检测样本中致病性与非致病性大肠杆菌核酸，覆盖所有大肠杆菌菌株。试剂盒特异性强，不与其他肠道杆菌交叉干扰，适配食品、水体、临床粪便、畜禽样本，适用于各类场景下大肠杆菌的全面筛查、菌群检测和污染风险评估。
产品名称 | 大肠杆菌通用PCR检测试剂盒含致病性和非致病性 | 货号 | YS-P014109 |
英文名称 | E.coliPCR(） | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
大肠杆菌属共有的 uidAβ 葡萄糖醛酸酶基因，食品、粪便细菌 DNA 广谱筛查全部大肠杆菌。
通用荧光探针靶向 16S rRNA 保守序列，qPCR 区分大肠杆菌与其他肠杆菌科细菌。
样本增菌液提取细菌 DNA，属通用引物扩增标记基因，仅判定大肠杆菌存在，不分致病型。
操作步骤：
1. DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 标准曲线制备（独立操作区）
标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。
3. PCR反应体系配制（试剂配制区）
按以下比例配制（示例）：
| 组分 | 体积（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上机检测
程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。
数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。
注意事项：
1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域：试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区，各区实验服、移液器及耗材严禁混用，防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头，每步更换枪头；
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；
加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存，避免反复冻融，确保稳定性；
使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。
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