本试剂盒针对肠粘附性大肠杆菌专属毒力基因研发PCR检测体系，可专一性检测样本中的该致病菌株核酸。产品特异性强、灵敏度高，能够精准区分肠粘附性大肠杆菌与其他肠道致病性大肠杆菌，适用于慢性腹泻、肠道感染的病原诊断及食品污染检测。
产品名称 | 肠粘附性大肠杆菌PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P014136 |
英文名称 | Enteroadhesive E.Coli(EAEC)PCR | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
靶向 eaat 粘附毒力基因，粪便、食品样本细菌 DNA 特异性 PCR 鉴定粘附型菌株。
SYBR Green qPCR 扩增菌株粘附蛋白编码基因，熔解曲线区分其他致泻大肠杆菌。
食品匀浆增菌提取细菌核酸，致病型特异性引物扩增判定阳性污染。
操作步骤：
样本制备：
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制（20 μL体系示例）：
预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特异性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。
结果判读：
阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；
可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。
注意事项：
所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；
阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；
试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；
废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；
试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；
移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。
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