两歧双歧杆菌 新品

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两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum）是双歧杆菌属的革兰氏阳性厌氧杆菌，无芽孢，不运动，细胞呈双歧状或分叉状。广泛存在于人类肠道、阴道及口腔中，是人体正常菌群成员，具有益生特性，可调节肠道微生态平衡，抑制病原菌生长，增强宿主免疫力，还能发酵多种糖类产生乙酸和乳酸，为结肠细胞提供能量，维持肠道屏障功能，在食品工业中可用于生产益生菌补充剂、发酵乳制品等，是研究肠道微生态和益生菌作用机制的重要菌株之一。
培养基  蛋白胨：15.0，葡萄糖：20.0，酵母浸粉：2.0，可溶性淀粉：0.5，氯化钠：5.0，L-半胱氨酸：0.5，番茄浸粉：5.0，肝浸粉：2.0，吐温80：1.0ml，琼脂20.0，pH：7.0±0.1(25℃)

生长条件  37℃；3-4天；厌氧

生长特性  G+，细胞杆状，0.55 μm×1.82~2.12μm，单生、成对、V字或堆状排列，不产芽胞。严格厌氧，发酵葡萄糖产乳酸。

存储条件  2-8℃

安全等级  1

形态  菌落直径为0.5-1mm，圆形，边缘整齐，不透明，正面白色，中间凸起，表面光滑，质地湿润，易挑起，G＋（蓝紫色），杆菌

分离基物  婴儿粪便

模式菌株  yes

操作步骤  ①准备上述平板2块（置于厌氧环境平衡24h）；②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取0.5mL无菌水（置于厌氧环境平衡24h）打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入2块平板，200μL/个，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用

应用领域  分类学研究，益生菌。GB 4789.34-2016双歧杆菌检验

共享方式  公益性共享

菌种保存:

低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。

保藏方法大致可分为以下几种：

1．传代培养 保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌 用），培养后于4—6℃冰箱内保存。

2．液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3．载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4．寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5．冷冻保藏法

可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。

有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

菌种活化与培养:

菌种活化

从冻存管或斜面培养基中取出菌种，接种至新鲜培养基中

在适宜条件下（如37°C，摇床培养）进行预培养，使菌种恢复活性。

扩大培养

将活化后的菌液按一定比例接种至新鲜培养基中。

控制培养条件（温度、转速、通气量等），确保菌体生长处于对数期。

菌液浓度测定

使用分光光度计测定OD600值，评估菌液浓度。

根据实验需求调整菌液浓度。

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