人副神经节瘤细胞永生化细胞专用培养基

人副神经节瘤细胞永生化细胞专用培养基

商品属性：

产品介绍：

人副神经节瘤细胞永生化细胞专用培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持人副神经节瘤细胞永生化细胞 最佳的生长状态。

本产品中已包含人副神经节瘤细胞永生化细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于人副神经节瘤细胞永生化细胞 的培养。

肿瘤细胞培养体系     500 ml

产品主要成分

原代肿瘤细胞基础培养基         440 ml

原代肿瘤细胞培养添加剂     5 ml

特级胎牛血清           50 ml

P/S青霉素-链霉素    5 ml

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：    2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。
质量控制

实验原理：

以RPMI-1640培养基为基础，添加10%优质胎牛血清、1%双抗及神经生长因子（NGF），模拟人副神经节瘤永生化细胞的生理环境。培养基中的营养成分和生长因子可支持细胞增殖并维持其神经内分泌特性（如儿茶酚胺分泌），用于副神经节瘤的发病机制研究及药物筛选。
准备工作：

1. 试剂与材料

细胞专用培养基（包含基础培养基、生长添加剂、特级胎牛血清、双抗）

不含钙、镁离子的PBS缓冲液

0.25%Trypsin-0.02%EDTA消化液

无血清细胞冻存液

T25培养瓶、6cm培养皿、无菌离心管、移液枪及枪头等无菌耗材

2. 仪器设备

37℃、5%CO₂培养箱

低温离心机

-80℃超低温冰箱

液氮罐

倒置显微镜

超净工作台

培养基配制：

在超净工作台中，将500ml基础培养基倒入无菌容器中。

依次加入5ml上皮细胞生长添加剂、10ml特级胎牛血清和5ml双抗（青霉素/链霉素），轻轻摇晃容器使其充分混合均匀。

用0.22μm孔径的无菌滤膜对混合后的培养基进行过滤除菌，然后转移至无菌培养基瓶中备用。
操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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