小鼠肝星状细胞永生化细胞专用培养基

小鼠肝星状细胞永生化细胞专用培养基

商品属性：

产品介绍：

小鼠肝星状细胞永生化 细胞专用培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持小鼠肝星状细胞永生化  细胞最佳的生长状态。

本产品中已包含小鼠肝星状细胞永生化 细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于小鼠肝星状细胞永生化 细胞的培养。

星状细胞培养体系     500 mL

产品主要成分

星状细胞基础培养基      440 ml

星状细胞培养添加剂     5 ml

特级胎牛血清         50 ml

P/S青霉素-链霉素     5 ml

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：    2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。
质量控制

实验原理：

以DMEM高糖培养基为基础，添加10%优质胎牛血清、1%双抗及肝星状细胞激活因子（如TGF-β），模拟小鼠肝星状永生化细胞的肝脏微环境。培养基中的成分可维持细胞的激活状态（如胶原蛋白合成、肝纤维化促进），用于小鼠肝纤维化、肝硬化等疾病的研究及抗纤维化药物筛选。
使用方法：

1. 培养基配制（若为干粉或基础培养基）

将500ml基础培养基溶解于适量超纯水中，搅拌均匀。

依次加入5ml生长添加剂、10ml特级胎牛血清和5ml双抗，轻轻摇匀。

用无菌滤膜（0.22μm孔径）对混合后的培养基进行过滤除菌，转移至无菌容器中备用。

2. 细胞培养操作

（1）复苏细胞

将含有1ml细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃加速解冻。

解冻后，将细胞悬液转移至无菌离心管中，加入4ml完全培养基混合均匀。

1000rpm离心3min，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。

将细胞悬液接种至T25培养瓶或6cm培养皿中，补充适量完全培养基，置于37℃、5%CO₂培养箱中培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。

（2）传代培养

当细胞密度达到80%-90%时，进行传代操作。首先弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加入1ml消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min，显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落时，迅速拿回操作台。

轻敲培养瓶，加入2-3ml完全培养基终止消化，轻轻吹打制成单细胞悬液。

将细胞悬液转移至无菌离心管，1000rpm离心5min，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。

按1:2的比例将细胞悬液接种至新的培养瓶或培养皿中，补充完全培养基至8ml，置于培养箱中继续培养。

（3）细胞冻存

待细胞生长状态良好时，收集细胞悬液，1000rpm离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍。

加入无血清冻存液，调整细胞密度至5×10⁶～1×10⁷/mL，轻轻混匀。

将细胞悬液分装至冻存管中，每管1ml，做好标记。

将冻存管放入-80℃冰箱预冻24h后，转入液氮罐中长期储存。
注意事项：

无菌操作 全程超净台操作，避免交叉污染；培养基出现浑浊、沉淀立即弃用。

温度控制 使用前必须 37℃预热，禁止直接冷培养基培养，避免细胞脱落、凋亡。

消化控制 产品对胰酶敏感，严格控制消化时间（1~3min），过度消化导致细胞损伤。

血清依赖 禁止使用＜10% FBS 培养，劣质血清会导致 AR/PSA 表达丢失、生长停滞。

雄激素实验 若开展雄激素相关实验，需更换为无酚红 RPMI-1640+10% 活性炭处理血清（CD-FBS），避免酚红弱雌激素干扰。

仅限科研 本产品仅用于科研实验，不可用于临床诊断、治疗。
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