猪鼻腔粘膜上皮细胞永生化细胞专用培养基

猪鼻腔粘膜上皮细胞永生化细胞专用培养基

商品属性：

产品介绍：

猪鼻腔粘膜上皮细胞永生化 细胞专用培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持 猪鼻腔粘膜上皮细胞永生化 细胞最佳的生长状态。

本产品中已包含 猪鼻腔粘膜上皮细胞永生化 细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于 猪鼻腔粘膜上皮细胞永生化 细胞的培养。

上皮细胞培养体系     500 ml

产品主要成分

上皮细胞基础培养基         480 ml

上皮细胞培养添加剂     5 ml

特级胎牛血清         10 ml

P/S青霉素-链霉素     5 ml

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。
质量控制

实验原理：

以BEGM支气管上皮细胞专用培养基为基础，添加10%优质胎牛血清、1%双抗及鼻腔黏膜上皮细胞生长因子，模拟猪鼻腔黏膜上皮永生化细胞的呼吸道微环境。培养基中的成分可支持细胞贴壁生长并维持其鼻腔黏膜上皮细胞功能（如黏液分泌、病原体防御），用于猪呼吸道疾病（如猪流感、猪传染性胸膜肺炎）的研究及药物筛选。
使用方法：

1. 培养基配制（若为干粉或基础培养基）

将500ml基础培养基溶解于适量超纯水中，搅拌均匀。

依次加入5ml生长添加剂、10ml特级胎牛血清和5ml双抗，轻轻摇匀。

用无菌滤膜（0.22μm孔径）对混合后的培养基进行过滤除菌，转移至无菌容器中备用。

2. 细胞培养操作

（1）复苏细胞

将含有1ml细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃加速解冻。

解冻后，将细胞悬液转移至无菌离心管中，加入4ml完全培养基混合均匀。

1000rpm离心3min，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。

将细胞悬液接种至T25培养瓶或6cm培养皿中，补充适量完全培养基，置于37℃、5%CO₂培养箱中培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。

（2）传代培养

当细胞密度达到80%-90%时，进行传代操作。首先弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加入1ml消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min，显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落时，迅速拿回操作台。

轻敲培养瓶，加入2-3ml完全培养基终止消化，轻轻吹打制成单细胞悬液。

将细胞悬液转移至无菌离心管，1000rpm离心5min，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。

按1:2的比例将细胞悬液接种至新的培养瓶或培养皿中，补充完全培养基至8ml，置于培养箱中继续培养。

（3）细胞冻存

待细胞生长状态良好时，收集细胞悬液，1000rpm离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍。

加入无血清冻存液，调整细胞密度至5×10⁶～1×10⁷/mL，轻轻混匀。

将细胞悬液分装至冻存管中，每管1ml，做好标记。

将冻存管放入-80℃冰箱预冻24h后，转入液氮罐中长期储存。
注意事项：

整个操作过程必须严格遵守无菌操作规范，避免细菌、真菌等微生物污染培养基和细胞。

运输用的灌液培养基不能再用于培养细胞，收到细胞后需更换为按照说明书新配制的完全培养基。

为保证细胞存活率，收到冻存细胞后请立即解冻复苏，若无法立即操作，冻存细胞可在-80℃条件下保存1个月。

首次传代建议采用1:2的传代比例，后续可根据细胞生长情况调整传代比例。

产品仅供科学研究使用，不可用于动物或人类疾病的治疗及临床诊断。
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