猪皮肤成纤维细胞永生化细胞专用培养基 新品

猪皮肤成纤维细胞永生化细胞专用培养基

商品属性：

产品介绍：

猪皮肤成纤维细胞永生化细胞专用培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持猪皮肤成纤维细胞永生化细胞最佳的生长状态。

本产品中已包含猪皮肤成纤维细胞永生化细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于猪皮肤成纤维细胞永生化细胞的培养。

成纤维细胞培养体系     500 ml

产品主要成分

原代成纤维细胞基础培养基         440 ml

原代成纤维细胞培养添加剂      5 ml

特级胎牛血清          50 ml

P/S青霉素-链霉素           5 ml

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：    2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。
质量控制

实验原理：

以DMEM高糖培养基为基础，添加10%优质胎牛血清、1%双抗及皮肤成纤维细胞生长因子（如EGF、PDGF），模拟猪皮肤成纤维永生化细胞的皮肤微环境。培养基中的成分可支持细胞增殖并维持其皮肤成纤维细胞功能（如伤口愈合、胶原蛋白合成），用于猪皮肤疾病（如烧伤、创伤）的研究及药物筛选。
准备工作：

1. 试剂与材料

细胞专用培养基（包含基础培养基、生长添加剂、特级胎牛血清、双抗）

不含钙、镁离子的PBS缓冲液

0.25%Trypsin-0.02%EDTA消化液

无血清细胞冻存液

T25培养瓶、6cm培养皿、无菌离心管、移液枪及枪头等无菌耗材

2. 仪器设备

37℃、5%CO₂培养箱

低温离心机

-80℃超低温冰箱

液氮罐

倒置显微镜

超净工作台

培养基配制：

在超净工作台中，将500ml基础培养基倒入无菌容器中。

依次加入5ml上皮细胞生长添加剂、10ml特级胎牛血清和5ml双抗（青霉素/链霉素），轻轻摇晃容器使其充分混合均匀。

用0.22μm孔径的无菌滤膜对混合后的培养基进行过滤除菌，然后转移至无菌培养基瓶中备用。
操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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