Recombinant Human EIF5A2
Recombinant Human EIF5A2（重组人真核翻译起始因子5A2）是一种在大肠杆菌或HEK293细胞中表达的科研蛋白，作为肿瘤转移和代谢重编程的关键驱动因子，它通过调控HIF1α表达及糖脂代谢重编程，促进食管鳞癌等恶性肿瘤的侵袭转移和化疗耐药，在癌症机制研究与靶向治疗领域具有重要价值13。
商品介绍：
A-01K102375-50μg | Recombinant Human EIF5A2 |
A-01K102375-200ug | Recombinant Human EIF5A2 |
A-01K102375-1mg | Recombinant Human EIF5A2 |
别称：9630038B20, eIF 5A 2, eIF 5A2, eIF-4D, eIF-5A-2, eIF-5A2, EIF5A 2, EIF5A2, eIF5AII, Eukaryotic initiation factor 5A isoform 2, Eukaryotic translation initiation factor 5A-2, Eukaryotic translation initiation factor 5A2, IF5A2_HUMAN
标签：N-terminal His-IF2DI Tag
种属：Human
宿主：E.Coli
表达区间：1-153
分子量：37.4 kDa
应用：Western Blot, ELISA
性状：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in PBS with 5% trehalose, pH7.4
纯度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
检测原理详解：
包被抗体结合
实验开始前，微孔板已预先包被?抗人白脂素单克隆抗体。当加入待测样本后，样本中的人白脂素（Asprosin）
会与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
形成“夹心复合物”
洗涤去除未结合物质后，加入?生物素标记的检测抗体，该抗体与白脂素分子的另一表位结合，形成“固相抗体
—抗原—检测抗体”三明治结构。
酶促显色反应
随后加入?辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，与生物素检测抗体结合。最后加入TMB显色底物，在
HRP催化下产生蓝色产物，反应终止后变为黄色。
浓度定量分析
黄色深浅与样本中白脂素含量成正比，通过酶标仪在450nm波长处测定吸光度（OD值），并根据标准曲线计
算出样本中白脂素的浓度。
公司正在出售的产品：
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R Cadherin/CDH4 | 组织中链脂酰氧化酶（acyl-CoA oxidase） |
Recombinant Human GDF9 | Recombinant Human LCMT1 |
实验步骤：
1. 基因克隆与表达载体构建
从人类FBN1基因C端序列中扩增?Asprosin编码片段（约140aa）。
将目的片段插入原核表达载体，确保带有?N端或C端His标签，便于后续纯化。
转化至?感受态细胞，筛选阳性克隆并测序验证。
2. 重组蛋白诱导表达
取阳性菌落接种于LB培养基（含氨苄青霉素），37℃振荡培养过夜。
次日按1:100比例转接至新鲜LB培养基，37℃培养至OD600达0.6–0.8。
加入?IPTG至终浓度0.1–1.0 mM?，?16–25℃诱导表达6–12小时（低温诱导有助于可溶性表达）。
4℃、8000×g离心10分钟收集菌体，弃上清，-20℃保存备用。
3. 菌体裂解与蛋白提取
将菌体沉淀重悬于?裂解缓冲液（如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制剂），超声破碎（冰浴条件下，每次30秒，共6–10次，功率30%）。
4℃、12000×g离心20分钟，收集上清（可溶性蛋白）或沉淀（包涵体蛋白）。
若为包涵体蛋白，需用?洗涤缓冲液（含2M尿素的PBS）洗涤2–3次，去除杂蛋白。
4. 亲和层析纯化（Ni-NTA法）
将含His标签的蛋白溶液（或溶解后的包涵体蛋白，使用含6–8M尿素的缓冲液溶解）上样至?Ni-NTA亲和层析柱。
用?洗涤缓冲液（含20–40mM咪唑）洗去非特异性结合蛋白。
用?洗脱缓冲液（含250–500mM咪唑）梯度洗脱目标蛋白，收集洗脱峰。
透析去除尿素与咪唑（使用PBS或生理缓冲液，4℃过夜，更换3次）。
5. 蛋白复性（针对包涵体蛋白）
若蛋白以包涵体形式表达，需在纯化后进行?梯度复性：
将变性蛋白缓慢加入含?梯度降低尿素?（6M → 4M → 2M → 0M）的复性缓冲液中，4℃搅拌过夜。
或采用?透析法?逐步去除变性剂。
复性后再次离心取上清，检测蛋白活性。
关键字： EIF5A2;Human;E.Coli;
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