基本信息
中文名称:DNA纯化柱
货号:P-PR1507
规格:100套/包
英文名称:DNA Purification Column
作用机制:采用特异性吸附材料,能选择性结合DNA,同时排斥蛋白质、多糖、脂类等杂质。通过离心或抽滤使含DNA的溶液流过柱子,DNA吸附在柱上,再用洗涤液去除杂质,最后用洗脱液将纯DNA洗脱下来。
适用样本:各类经裂解处理后的生物样本,如细菌菌液、动植物组织裂解液、血液裂解液、拭子洗脱液等。
产品概述
DNA纯化柱基于硅胶膜吸附原理,在高盐低pH环境下选择性结合DNA,低盐高pH环境下释放DNA,可快速实现DNA的分离与纯化,广泛应用于分子生物学实验中的各类DNA处理场景。
产品参数
适用DNA片段范围:100bp - 10kb(部分型号可支持更长片段)
DNA回收效率:约90%(接近片段范围阈值的DNA回收效率略低)
最大吸附量:常规型号≥10μg,中量型号可达100μg
洗脱体积要求:常规型号≥6μl,中量型号建议250μl
储存条件:室温(0 - 30℃)保存,有效期12 - 36个月(具体依型号而定)
组件配置
核心组件
DNA纯化柱(内置硅胶膜)
配套收集管(1.5ml/2.0ml/15ml,依型号选择)
配套试剂(需单独或随试剂盒购买)
结合液:含高浓度胍盐,调节pH至酸性,促进DNA与硅胶膜结合
洗涤液:含乙醇,去除蛋白、盐离子等杂质(首次使用前需按比例添加无水乙醇)
洗脱液:TE缓冲液(pH8.0)或去离子水,用于洗脱纯化后的DNA
操作流程
(一)常规PCR/酶切反应产物纯化
结合步骤
将50 - 400μl反应液转移至离心管中,加入3倍体积的结合液,充分混匀
将混合液转移至DNA纯化柱,室温放置2 - 5分钟
10,000 - 12,000rpm离心30 - 60秒,倒掉收集管中的废液
洗涤步骤
向纯化柱中加入500 - 700μl洗涤液
10,000 - 12,000rpm离心30 - 60秒,倒掉收集管中的废液
重复洗涤步骤1次
空柱12,000rpm离心2分钟,彻底去除残留乙醇
洗脱步骤
将纯化柱转移至新的离心管中
向硅胶膜中央加入20 - 50μl洗脱液(预热至60℃可提高洗脱效率)
室温放置2 - 5分钟
12,000rpm离心2分钟,收集管中即为纯化后的DNA
(二)琼脂糖凝胶DNA回收
胶块处理
用手术刀切下含有目标DNA的琼脂糖凝胶块,尽量去除多余凝胶
向胶块中加入3倍体积的结合液,55 - 60℃水浴加热,期间间断混匀,直至胶块完全溶解
后续步骤
按照「常规PCR/酶切反应产物纯化」中的结合、洗涤、洗脱步骤操作
(三)基因组DNA提取(部分型号适用)
样本裂解
针对不同样本(细胞、血液、组织等),使用配套裂解缓冲液进行充分裂解
必要时可加入蛋白酶K,56℃水浴消化蛋白质
结合与纯化
向裂解液中加入结合缓冲液,调节pH至酸性
后续步骤同「常规PCR/酶切反应产物纯化」
注意事项
试剂准备
洗涤液首次使用前必须按说明书比例添加无水乙醇,否则无法有效去除杂质
所有试剂使用前需恢复至室温,避免温度差异影响DNA结合效率
操作细节
上柱前需确保溶液pH<7,否则DNA无法有效结合至硅胶膜
洗脱液需加至硅胶膜中央,避免直接加至柱壁导致洗脱不完全
若需长期保存DNA,建议使用TE缓冲液洗脱,避免DNA降解
安全防护
操作过程中需佩戴一次性手套和实验服,避免样本污染和皮肤接触试剂
部分试剂含刺激性成分,如不慎接触皮肤或眼睛,需立即用大量清水冲洗
质量控制
纯度检测:纯化后DNA的A260/280比值应在1.7 - 1.9之间,A260/230比值≥2.0
完整性检测:通过琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳检测,DNA条带应清晰无弥散
下游验证:纯化后的DNA可直接用于PCR扩增、酶切、连接、测序等实验,验证其功能完整性
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