基本信息
中文名称：TUNEL细胞凋亡检测试剂盒
货号：P-PR1504
规格：30T、60T、8孔、16孔
英文名称：TUNEL Cell Apoptosis Detection Kit
作用机制：利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）将荧光标记的dUTP连接到凋亡细胞断裂的DNA 3'羟基末端，通过荧光显微镜或流式细胞仪检测荧光信号，从而识别凋亡细胞。
适用样本：贴壁细胞、悬浮细胞、组织切片等。
检测原理
细胞发生凋亡时，内源性核酸内切酶会被激活，将基因组DNA切断为180 - 200bp的片段，暴露出大量3'-OH末端。TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）技术利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT），将带有标记的dUTP连接到这些3'-OH末端，通过荧光显微镜或流式细胞仪即可检测到凋亡细胞。
试剂盒组分（以50次检测规格为例）
组分名称 规格 储存条件
平衡缓冲液 2.5mL -20℃
生物素标记dUTP 50μL -20℃
TdT酶 200μL -20℃
50×蛋白酶K 100μL -20℃
链霉亲和素 - HRP 25μL 4℃避光
DAB显色剂 5mg -20℃
操作流程
一、样本预处理
1. 细胞样本（贴壁/悬浮）
贴壁细胞：PBS洗涤2次，加入4%多聚甲醛室温固定25min；PBS洗涤3次，加入含0.3% Triton X - 100的PBS室温孵育5min通透处理；PBS洗涤3次。
悬浮细胞：1000g离心5min收集细胞，PBS洗涤2次；重悬于4%多聚甲醛中室温固定25min；1000g离心5min弃固定液，PBS洗涤3次；加入含0.3% Triton X - 100的PBS室温孵育5min；PBS洗涤3次。
2. 石蜡组织切片
二甲苯脱蜡2次，每次5 - 10min；依次经100%、95%、85%、70%乙醇梯度水化各5min；蒸馏水洗涤2次。
滴加蛋白酶K工作液（用PBS按1:50稀释50×蛋白酶K），37℃孵育15 - 30min（不同组织孵育时间需优化）；PBS洗涤3次。
3. 冰冻组织切片
4%多聚甲醛室温固定30 - 60min；PBS洗涤3次；加入含0.5% Triton X - 100的PBS室温孵育5min；PBS洗涤3次。
二、阳性/阴性对照设置
阳性对照：样本预处理后，滴加DNase I工作液（10U - 3000U DNase I溶于40mM Tris - HCl pH7.9、10mM NaCl、6mM MgCl₂、10mM CaCl₂溶液），室温 - 37℃孵育10 - 30min；PBS洗涤3次后与样本同步后续操作。
阴性对照：在后续标记反应中，不添加TdT酶，其余步骤与样本一致。
三、标记与显色反应
配制TUNEL反应液：取450μL标记溶液，加入50μL TdT酶，充分混匀，置于冰上备用（现配现用）。
标记反应：在样本上滴加50μL TUNEL反应液（6孔板每孔加100μL），置于湿盒中37℃避光孵育60min；PBS洗涤3次，每次5min。
显色反应：滴加DAB显色液（按说明书用PBS稀释DAB粉末），室温避光孵育5 - 10min，显微镜下观察显色程度；蒸馏水洗涤终止反应。
复染与封片：苏木素或甲基绿复染细胞核3 - 5min，流水冲洗返蓝；经梯度乙醇脱水、二甲苯透明后，用中性树胶封片，光学显微镜下观察。
注意事项
所有试剂使用前请离心集液，微量试剂建议使用高精度移液枪。
TUNEL反应液需现配现用，不宜长期保存；DAB溶液颜色变深呈紫色时禁止使用。
实验过程中注意保持样本湿润，避免液体干涸导致非特异性染色。
不同类型样本的固定、通透及孵育时间需根据实际情况优化调整。
DAB为潜在致癌物，操作时需注意防护，避免直接接触。
公司正在出售的产品
人疱疹病毒6A型PCR试剂盒 | 米德尔堡病毒PCR检测试剂盒 |
植物源性成分PCR检测试剂盒 | 伤寒抗原ELISA试剂盒 |
白蔹染料法PCR鉴定试剂盒 | IgE-Fc受体ⅠELISA试剂盒 |
肠道病毒EV70 PCR检测试剂盒 | 同猪疱疹病毒2型)猪巨细胞病毒PCR试剂盒 |
螺源性成分PCR试剂盒 | 马杜拉分枝菌PCR检测试剂盒 |
禽腺病毒（8b型）PCR试剂盒 | 新凶手弗朗西斯菌PCR检测试剂盒 |
禽腺病毒B型PCR试剂盒 | 东方泰勒虫PCR试剂盒 |
罗西奥病毒PCR检测试剂盒 | 小孢子酒曲菌PCR试剂盒 |
轮状病毒PCR检测试剂盒 | 雅氏瓦螨PCR检测试剂盒 |
病毒通用型(AIV-U)PCR检测试剂盒(荧光-PCR法) | 登革热病毒PCR检测试剂盒 |
猪流感病毒PCR检测试剂盒 | 东部马脑脊髓炎病毒PCR检测试剂盒 |
单纯疱疹病毒抗原-1ELISA试剂盒 | 鸭源性成分(Duck)核suan检测试剂盒 |
层粘连蛋白α2ELISA试剂盒 | TUNEL细胞凋亡检测试剂盒PL12抗体/抗丙氨酰tRNA合成meiELISA试剂盒 |
协同刺激分子受体ELISA试剂盒 | Janus激mei1ELISA试剂盒 |
超敏游离雌三醇ELISA试剂盒 | Na+/H+交换体3ELISA试剂盒 |
关键字： TUNEL细胞凋亡检测试剂盒;TUNEL Cell Apoptosis;
派瑞曼pyram?是上海博湖生物科技有限公司（Shanghai Bohu Biological Technology Co., Ltd.，China）的产品品牌。
派瑞曼pyram?是一家化学、生化和材料科学等领域的科研用研发产品的制造商和供应商,我们的产品在相当宽的基础科学领域得到广泛的应用。 客户包括学术界、工业界和政府的研究和开发实验室以及制药、生物技术、化工/石化行业等具商业规模的企业。
派瑞曼pyram?除包括化学、分析化学、生命科学、材料科学和病理科学产品。质量是所有产品和服务最关键的组成部分,我们通过质量和实力赢得客户的信赖。产品的质量是企业的生命。
公司秉承"专注品质、诚信为本、服务至上、合作共赢"的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务,力求为我国科研事业更好的,更专业的服务！